主题：【原创】甜味剂之王“三氯蔗糖”的测定（GB 22255-2014）

三氯蔗糖
是唯一以蔗糖为原料的功能性甜味剂，甜度可达蔗糖 600 倍。这种甜味剂具有无能量，甜度高，甜味纯正，高度安全等特点。是目前最优秀的功能性甜味剂之一。因此，它将取代阿斯巴甜，成为新的甜味剂之王，是肥胖症、心血管病和糖尿病患者理想的食品添加剂，在食品和医药中的应用不断扩大。

1、适用范围
食品中（含蛋白脂肪试样，酱及酱制品、醋、酱油，含酒精的试样，饮料，风味发酵乳、奶茶）三氯蔗糖的测定方法。（本实验选用酱油、可乐和酸奶）
2、提取步骤
称取 2g 均匀试样，置于 50mL 离心管中，加入 1.0g 中性氧化铝，加入 3mL 水，振荡 3min 振荡 3min 后加入 15mL 甲醇，振荡 30s，超声 20min，离心（3000r/min）10min，转移上清液至 50mL 离心管中，沉淀物中加入 5.0mL 甲醇水 75%，振荡 30s，离心（3000r/min）10min，取上清液，重复提取沉淀物 2 次，上清液合并于 150mL 分液漏斗中。
在分液漏斗中加入 30mL 正己烷，振摇 2min，静置 20min，下层水相移置 50mL 蒸发皿。蒸发皿沸水浴上蒸发，蒸干至 1mL 左右，用 9mL 水分三次冲洗蒸发皿，将冲洗液合并至 15mL 离心管中，超声 5min，离心（3000r/min）10min。待净化。
称取均匀试样 5g，置于 15mL 离心管中，加入 5mL 水，振荡 30s，离心（3000r/min）10min，待净化。
称取均匀试样 5g 置于 50mL 离心管中，加入 5mL 水，涡旋 3min，加入 15mL 甲醇、0.50mL 乙酸锌溶液、0.50mL 亚铁氰化钾溶液，振荡 30s，超声 20min，离心（3000r/min）10min，转移上清液至 50mL 离心管中，沉淀物中加入 5.0mL 甲醇水 75%，振荡 30s，离心（3000r/min）10min，取上清液，重复提取沉淀物 2 次，上清液合并于 150mL 分液漏斗中。
在分液漏斗中加入 30mL 正己烷，振摇 2min，静置 20min，下层水相移置 50mL 蒸发皿。蒸发皿沸水浴上蒸发，蒸干至 1mL 左右，用 9mL 水分三次冲洗蒸发皿，将冲洗液合并至 15mL 离心管中，超声 5min，离心（3000r/min）10min。待净化。
3、SPE净化步骤
SPE柱：BRP 200mg/6mL
活化：4mL 甲醇，4mL 水
上样：待净化液
淋洗：1mL 水（上样液在柱上液面还剩 2mm 时加入，弃去），抽干
洗脱：3mL 甲醇（收集），抽干
浓缩：将洗脱液置于 50mL 蒸发皿内，沸水浴上蒸干，用乙腈水溶液（11+89）溶解，并定容到 1mL，过 0.22μm 滤膜，滤液待上机检测。
4、注意事项
加标过程：
★ 精确移取 0.5mL 2mg/mL 标样，加入到 5g 可乐样品中，加标浓度即为 200mg/kg。
★ 精确移取 0.5mL 2mg/mL 标样，加入到 2g 酱油样品中，加标浓度即为 500mg/kg。
★ 精确移取 1mL 2mg/mL 标样，加入到 5g 酸奶样品中，加标浓度即为 400mg/kg。
5、仪器参考条件
色谱柱：月旭Ultimate® XB-C18  4.6×150mm, 5μm
流动相：水+乙腈=89+11
流速：1.0mL/min
柱温：35℃
进样量：20.0μL
示差检测器条件：温度 35℃
6、色谱图及加标回收结果

图1、三氯蔗糖对照品1mg/mL

图2、酸奶样品加标 400mg/kg

图3、可乐样品加标 200mg/kg

图4、酱油样品加标 500mg/kg

表1、加标回收率表

7、相关产品信息