解答:
一、食品、饲料、土壤样品前处理方法
1.提取:取样2.0 g(?0.01 g)于50 mL离心管中,加入20 mL丙酮 正己烷(1 2,V V)(饲料样品需再加入4~5滴磷酸),再加入10 g无水硫酸钠均质30s,再用20 mL丙酮 正己烷(1 2,V V)清洗均质头,土壤样品不均质,直接超声30分钟取上清液,土壤样品残渣继续用20mL丙酮 正己烷(1 2,V V)涡旋提取;合并提取液3500 r/min离心5分钟,上清液经装有10g无水硫酸钠的漏斗脱水于鸡心瓶中,再用10mL丙酮 正己烷(1 2, V V)冲洗漏斗上的残渣合并洗液40 ℃浓缩至干;用正己烷2.5mL?3次漩涡振荡器洗涤鸡心瓶,合并洗液35℃左右氮气吹干,用正己烷定容至2.00mL,待净化。
2.净化:先加入1mL浓硫酸,不涡旋直接离心,弃去下层浓硫酸,重复3次,然后再加入约1mL浓硫酸,涡旋离心弃去下层浓硫酸,重复多次至下层浓硫酸澄清为止,离心取上清液上机测试。
二、对前处理的注释
1.标准GB/T5009.19-2008所用的色谱柱为填充柱,标准GB 5009.190-2014所用的色谱柱为DB-5MS或者等效柱,标准GB/T13090-2006中是填充柱或毛细管柱,标准GB/T 14550-2003中是填充柱或DB-17,实验室用等效柱HP-1和HP-5。
2.所用有机溶剂均为分析纯以上,如遇试剂有问题,则应查批号并告知采购专员。提取时用到的试剂均用分析纯,定容时用色谱纯。
3.GB 5009.190-2014(第二法)中称样5.0~10.0 g,GB/T 5009.19-2008(第二法)中根据基质不同,称样0.5~20.0 g,GB/T 13090-2006中称样5.0 g,GB/T 14550-2003中称样20.0 g,振荡提取30 min或超声提取15 min,实验室操作统一称样2.0 g,除土壤样品超声外其余分散提取一次。
4.标准GB/T 5009.19-2008(第二法)和GB/T 14550-2003中六六六、滴滴涕检测提取所用溶剂为丙酮和石油醚,标准GB 5009.190-2014(第二法)中多氯联苯检测用正己烷和二氯甲烷进行提取,标准GB/T 13090-2006中提取液过无水硫酸钠漏斗除水,实验室这些项目的检测都用丙酮和正己烷提取,用无水硫酸钠除水和分散研磨。
5.标准GB/T 13090-2006中提取液定容至25mL后取5mL提取液浓硫酸净化后吹干定容2mL,相当于1 g样定容2mL;标准GB/T 14550-2003中提取液全部浓缩后定容至10mL,相当于4g样定容2mL;实验室方法提取液全部经真空浓缩后吹干定容至2mL再经浓硫酸净化,相当于2 g样定容2mL。
6.标准GB 5009.190-2014(第二法)中多氯联苯检测经浓硫酸脱脂后过碱性氧铝柱净化,实验室用浓硫酸净化。
三、注意事项
1.加标回收:采用空白样品进行加标,准确吸取0.02μg/mL混合标准工作液1.00mL到空白样品中,提取步骤同样品一致,对应最终样品加标水平0.01 mg/kg。多氯联苯项目,需在称样后加入0.02 μg/mL PCB198内标1.00mL,对应样品中的内标浓度为0.01 mg/kg。同一批样品若基质相近则只做一个加标,若相差较大需要一类基质加一个标。有机氯的加标回收率应在60 %~120 %之间;多氯联苯的加标回收率应在60%~120%,PCB 138的回收率较其他PCB(s)为低。若达不到,需分析原因如有必要重新试验直到符合为止。
2.标液:准确吸取0.02μg/mL六六六滴滴涕混合标准工作液5.0mL,定容至10.0mL,得到六六六滴滴涕0.01μg/mL上机液。多氯联苯上机液则准确吸取0.2μg/mL混合多氯联苯标准工作液(除内标PCB198)0.50mL和准确吸取0.2μg/mLPCB198内标0.50mL定容至10.0mL,得到多氯联苯0.01μg/mL上机液。
3.分散提取要充分,遇到样品与无水硫酸钠结块一定要打碎。
4.正己烷定容后,加浓硫酸磺化过程的时间不可太长,以防正己烷挥发。
5.若样品较脏浓硫酸净化的次数将会增加,此时可使用新离心管将上层澄清液取出,继续用浓硫酸净化,但需注意防止正己烷挥发。
6.浓硫酸净化时,加入量不宜过多,且要多次净化,直到浓硫酸层比较澄清为止。
7.初测加标水平为检出限,如检出阳性样品,需复测,样品做双平行,需要做标准曲线上机定量,标准曲线至少包含5个点,且所有样品和加标的值均要在标准曲线范围内,检出值接近标准曲线中间点;加标加在相同或相近基质空白样品中,加标水平要与检出量相当;如无相同或相近基质空白样品,则可直接加在阳性样品中,加标水平要相当于检出量的3倍,带一个类似基质的空白样品一个。若检出含量非常高,样品需稀释上机,并在原始记录上备注稀释过程。
8.如果发现样品提取液的含油量较多,在浓硫酸净化前增加一个正己烷-乙腈液液分配以除油脂,具体操作步骤如下:将“40℃浓缩至干,用正己烷2mL?3次漩涡振荡器洗涤鸡心瓶,合并洗液35℃左右氮气吹干,用正己烷定容至2.00mL”更改为“40℃浓缩至干,用正己烷2mL?3次漩涡振荡器洗涤鸡心瓶,合并洗液于15mL玻璃离心管中,35℃左右氮气吹干;分别加入正己烷3mL、乙腈3mL,涡旋混匀,一次性吸管去除正己烷层;再加入正己烷3mL,涡旋混匀,一次性吸管去除正己烷层。剩余乙腈相35℃左右氮气吹干,用正己烷定容至2.00mL。”
9.鱼、肉及其干制品,茶叶等颜色较深的复杂基质,前3次加1mL浓硫酸净化时,不涡旋,直接离心弃去下层浓硫酸,继续净化至上下层分层明显,可以把上层正己烷层转移至另一只玻璃离心管,再进行净化。