主题：【已应助】有没有高手会配置氨基酸分析用的茚三酮溶液

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发表于：2021/03/11 08:33:39 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我们现在用一套美国的氨基酸分析试剂包，其中茚三酮比较贵而且还容易氧化，用起来很不方便。想问下有没有高手会配置这个溶液的？另外，其他牌子比如日立的茚三酮是否能通用？有知道的话可以加我qq 1437313202，必有重谢！

推荐答案：myoldid回复于2021/03/23

到目前为止茚三酮仍是最常用的氨基酸分析试剂，它通常包含下列各项化学成分:

茚三酮固体（晶体）

用于溶解茚三酮的有机溶剂

强烈的缓冲溶液以利于得到茚三酮反应最适宜的pH值

还原剂。

1升钾钠缓冲液配制方法, （pH 5.5--pH5.6 ）

量取508 ml 去离子水，把其中400-500ml倒入一个干净的 1 L大口杯；

称出196.0g醋酸钾加入烧杯中，用搅拌器缓慢搅拌使其完全溶解，

称出272.0g三水乙酸钠加入烧杯中，一边搅拌，一边慢慢地将200ml乙酸加入溶液

用剩下的去离子水涮洗称量用的烧杯，把盐全部洗到烧杯中，最终要把量取的508 ml去离子水全部加入，不能多，也不能少。

超声并适当搅拌直到醋酸钠完全溶解（为避免试剂吸收空气中的氨气，不能对试剂加热）；

让溶液冷却到室温；

用0.45μm的水系滤膜过滤，将过滤后溶液在室温下的密封玻璃瓶中保存。

如果试剂含水量与配方不同，则需在过滤前定容到1升

制备茚三酮试剂（总体积1 L）

制备茚三酮试剂应使用仪器溶液冷储室（S7130）中的棕色试剂瓶；

将茚三酮试剂瓶从仪器上取下，将剩余的溶液倒入废液容器（或废液池），仔细清洗试剂瓶（必要时用1%硝酸和甲醇/乙醇，超声清洗茚三酮溶液过滤头）；

向干净的试剂瓶中倒入600 ml甲醇（建议甲醇用色谱纯，为改善溶液性能，可在甲醇中加入适当比例的乙二醇甲醚等溶剂，详见茚三酮溶液配方）；

加入20 g 茚三酮晶体，2 g苯酚（不必精确。为方便，可以预先加到甲醇中），缓慢摇动或搅拌，帮助溶解茚三酮固体；

用0.45μm的有机系滤膜过滤（优质茚三酮固体可不过滤，则可以直接在茚三酮试剂瓶中溶解茚三酮固体，且不必等到完全溶解，就可以加入钾钠缓冲液）

加入400 ml过滤后的常温钾钠缓冲液（刚配好或冷藏后，请放置到室温再使用）

（转移到茚三酮试剂瓶中）；用氮气从底部吹大约3至5分钟；

加入还原剂 (高纯VC约0.2g，建议0.20g-0.22g, 还原剂应避光冷藏防止失效)；

再用氮气从底部吹大约3至5分钟；

将此茚三酮溶液用氮气密封10小时（气压约0.6 bar）后使用效果更佳。

注意：1.在配制过程中，剧烈搅拌和长时间暴露在空气中会使钾钠缓冲液和茚三酮试剂试剂质量变差。

2.钾钠缓冲液配制过程中会放热，溶液温度升高，必须等温度降下来（室温或室温以下）再用。

3.应尽量避免蛋白相关有机物、氨、二氧化硫进入到试剂中，否则会导致试剂变差，甚至变质。

4.钾钠缓冲液常温下密封一般可放置12个月以上不变质，但配制好的茚三酮溶液则应尽快使用。如果一定要线下放置茚三酮，必须吹上氮气冷藏，即使这样，茚三酮溶液的质量也可能会变差，当看到明显沉淀时，应立即停止使用并清洗容器和管路。

注：具体配制方法参见茚三酮配制方法

1升钾钠缓冲液配方：（pH5.5-pH5.6）

乙酸钾（分子量：98.14）： 196.0g

三水乙酸钠（分子量： 136.08）： 272.0g

乙酸： 200ml （99%－100%）

去离子水：定容到1升（也可以固定水量，配成一升）

1升茚三酮溶液配方：（避光密封冷藏保存，现用现配）

茚三酮： 20g

苯酚： 2g（不必精确。可预先加到甲醇中）

甲醇： 600ml（可根据需要加入部分乙二醇甲醚或其他适合的有机溶剂）

钾钠缓冲液： 400ml（有机溶剂与钾钠缓冲液的比例，在6:4到7:3之间均可，但应保持固定以免影响峰面积）

注：为改善茚三酮溶液的溶解性，推荐用（300ml甲醇+300ml乙二醇甲醚，允许偏正负5ml）来替代600ml甲醇。但应预先测试，确保所用的乙二醇甲醚不含过氧化物。测试方法：将5ml5%的碘化钠（碘化钾）溶液加入到5ml乙二醇甲醚中，如果溶液保持清澈则说明此乙二醇甲醚溶液不含过氧化物，可以放心使用；如果溶液变成黄色，则必须再对乙二醇甲醚进行处理或者更换。

还原剂：

每1000ml茚三酮溶液中，加入0.2g（0.20g-0.22g)高纯度抗坏血酸(即VC）或SYKAM公司提供的定量还原剂。

还原剂加入方法：把配好的茚三酮倒入茚三酮试剂瓶中，用氮气从瓶底吹3-5分钟，加入还原剂，摇匀，再用氮气从瓶底吹3-5分钟，盖好茚三酮试剂瓶盖，关闭底部吹气阀和泄压阀，打开保护气的进气阀和溶液阀。建议放置4个小时以后再进样。

试剂流路清洗液配方：

20%-50%的异丙醇（或甲醇）去离子水溶液，超声或抽滤脱气后使用。

建议化学品生产厂家（参考）：（纯度>分析纯）

茚三酮：上海国药（沪试），德国赛卡姆公司

乙酸钠、乙酸钾、乙酸：

广东光华化学厂有限公司

北京北化精细化学品有限责任公司（北京化工厂）

如果特别注重分析效果，推荐使用Merck(默克）、AlfaAesar（阿法艾莎）、Sigma等进口优质试剂

以上摘自赛卡姆的帮助文件，参见https://www.sykam.com.cn/S433D/index.htm

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