菌落总数测定方法介绍
一、菌落总数测定法法适用范围:
? ? ? ? ?可用于各类食品及原料中菌落总数的测定。也可用于与食品接触的容器、操作台和其他设备表面的卫生检测。
二、菌落总数测定方法原理和测定方法:
? ? ? ? 将营养培养基、凝胶和氯化三苯基四氮唑(TTC)显色剂等加载在试纸片,经加样、培养后,细菌菌落在测试片上显现出红色菌斑,通过计数报告结果。
操作方法:1样品处理:无菌称取样品25g(或25mL)放入含有225mL无菌生理盐水的采样瓶或均质杯内,经充分振摇(均质)做成1:10的稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内,用1mL灭菌吸管反复吸吹制成1:100的稀释液。以此类推,做出1:1000等稀释度的稀释液,每个稀释度更换一支灭菌吸管。2接种:一般食品选2~3个稀释度进行检测,含菌量少的液体样品(如食用纯水和矿泉水等)可直接用原液检测。将测试片放在水平台面上,揭开上面的透明薄膜,用灭菌吸管吸取样品原液或稀释液1mL,均匀加到中央的纸片上,轻轻将上盖膜放下,静置5 min使培养基凝固,最后用手轻轻地压一下。每个稀释度接种两片。3培 养: 将测试片叠在一起放回原自封袋中,透明面朝上水平置于恒温培养箱内,堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃,培养15~24h。
三、测定 结果判断与计数:
细菌在纸片上生长后会显示红色斑点,选择菌落数适中(10个~100个)的纸片进行计数,乘以稀释倍数后即为每克(或毫升)样品中所含的细菌菌落总数。菌落数在100以内时,按实有数报告。大于100时,用二位有效数字,二位有效数字后面的数字,以四舍五入方法计算,并以10的指数来表示。
通常选择菌落在10个~100个之间的纸片进行计数,乘以稀释倍数报告之(见下表中例次1)。国家标准菌落总数报告方式术语为cfu/g或mL,cfu的含义为菌落形成单位。若有两个稀释度的菌落数在10个~100个之内,两者的比值小于2,则取其平均数,若大于2,则采用稀释度小者报告(见下表中例次2和例次3)。若三个稀释度的菌落数都有在10个~100个之内时,应选择二个低数值的平均数(见下表中例次4)。若三个稀释度的菌落数均小于10个或大于100个时,应重新试用更低或更高的稀释度进行菌落计数;或采用均小于数量标准的最小值,或采用均大于数量标准的最大值(见下表中例次5和例次6)。
大肠杆菌大肠菌群检验方法介绍
一、 大肠杆菌检验原理及适用范围:
? ? ? ? ?大肠杆菌( Escherichia coli )和大肠菌群(Coliform)都是存在于温血动物肠道和粪便的细菌,是条件性致病菌,主要造成水体污染,也可能引起食物中毒的发生。大肠杆菌大肠菌群测试片(E.coli / Coliform Count Plate)是一种预先制备好的一次性培养基产品,可以同时检测大肠杆菌和大肠菌群,含有大肠菌选择性培养基、冷水可溶性的吸水凝胶和半乳糖苷酶(GAL)和葡萄糖醛酸酶(GUD)指示剂。大肠杆菌显蓝色,其他大肠菌群显红色,蓝点加上红点为总的大肠菌群数。本产品适合于食品及原料中大肠菌群的计数,如消毒牛乳、冷饮和调味品等样品的检测,也可用于表面的卫生检测。
二、快速检验操作方法
2.1 样品处理:取样品 25 mL(g)放入含有225 mL灭菌生理盐水的取样罐或均质杯内,制成1:10的样品匀液,用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内,振摇后成为1:100的稀释液。
2.2 接种:一般食品选1~2个稀释度进行检测,含菌量少的液体样品(如饮用纯水和矿泉水等)可直接吸取原液进行检测。将大肠杆菌大肠菌群测试片(BE203)置于平坦实验台面,揭开上层膜,用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上,然后再将上层膜缓慢盖下,静置5 min使培养基凝固,最后用手轻轻地压一下,每个稀释度接种两片。
2.3 培养: 将测试片叠在一起放回原自封袋中,透明面朝上水平置于恒温培养箱内,堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃,培养15~24h。
三、大肠杆菌群结果判定:
培养后大肠杆菌显蓝色,其他大肠菌群显红色,蓝点加上红点为总的大肠菌群数。选择有阳性菌落的最高稀释度的测试片进行计数,然后乘以稀释倍数即为样品中每毫升(克)含有大肠菌群数。?如果样品的酸碱度pH 7.0以下时,应先用灭过菌的碱性溶液(如1mol/LNaOH)调节到pH7.0-~8.0。大肠杆菌大肠菌群测试片对纯菌的检测灵敏度可达0.15 cfu/mL。一般食品对于大肠菌群的要求都比较严格,如果测试片上有成片的红点,或者中央没有红点,但边缘有很多红点,一定是已经严重超标,建议按多不可计来报告。
四、 结果判断与计数:
1细菌在纸片上生长后会显示红色斑点,选择菌落数适中(10个~100个)的纸片进行计数,乘以稀释倍数后即为每克(或毫升)样品中所含的细菌菌落总数。菌落数在100以内时,按实有数报告。大于100时,用二位有效数字,二位有效数字后面的数字,以四舍五入方法计算,并以10的指数来表示。
2计数原则与报告方式
2.1 通常选择菌落在10个~100个之间的纸片进行计数,乘以稀释倍数报告之(见下表中例次1)。国家标准菌落总数报告方式术语为cfu/g或mL,cfu的含义为菌落形成单位。
2.2 若有两个稀释度的菌落数在10个~100个之内,两者的比值小于2,则取其平均数,若大于2,则采用稀释度小者报告(见下表中例次2和例次3)。
2.3 若三个稀释度的菌落数都有在10个~100个之内时,应选择二个低数值的平均数(见下表中例次4)。
2.4 若三个稀释度的菌落数均小于10个或大于100个时,应重新试用更低或更高的稀释度进行菌落计数;或采用均小于数量标准的最小值,或采用均大于数量标准的最大值(见下表中例次5和例次6)。
例次
稀释度
两稀释
度之比
选定计数
稀释度
报告方式
(个/g或
个/mL)
10-1
10-2
10-3
1
2
3
4
5
6
158
208
265
98
8
295
76
68
82
50
5
174
5
12
50
15
1
106
—
1.8
6.1
—
—
—
10-2
10-2、10-3
10-2
10-1、10-2
10-1
10-3
7.6×103
9.4×103
8.2×103
3.0×103
8.0×10
1.1×105
五、?表面取样方法:加1mL灭菌生理盐水在测试片上,静置至少1h使培养基凝固;提起上层膜,使中央滤纸部分贴到待测物表面,用手在外侧轻压;然后将上盖膜合上,置培养箱内培养。