活化液
活化的目的是创造一个与样品溶剂相容的环境并除去柱内所有杂质。通常需要两种溶剂来完成上述任务,第一个溶剂(初溶剂)用于净化固定相,另一个溶剂(终溶剂)用于建立一个合适的固定相环境使样品分析物得到适当的保留。每一活化溶剂用量约1-2mL/100mg 固定相。
无论固相萃取柱的来源或质量,未经活化都有可观的杂质存在。由于许多杂质能污染萃取后的分析物,故在样品萃取前必须除去这些杂质。除去杂质的最好方法就是用初溶剂,这样就可以除去所有可能与分析物一起洗出的物质;杂质除去不彻底,将导致最终色谱图上额外峰的干扰。
终溶剂不应强于样品溶剂,若使用太强的溶剂,将降低回收率。通常采用一个弱于样品溶液的溶剂不会有什么问题。在理想情况下,终溶剂应该与样品溶剂性质相似。例如,一个水样被HCl 调节到pH2,终溶剂(水)也应用HCl 调节到pH2。
值得注意的是,在活化的过程中和结束时,固定相都不能抽干,因为这将导致填料床出现裂缝,从而得到低的回收率和重现性,样品也没得到应有的净化。如果在活化步骤中出现干裂,所有活化骤都得重复。
在建立固相萃取方法时,柱的活化经常被忽视。其实不当的活化经常是低回收率、失败的样品净化或重现性差的来源。
淋洗液
分析物得到保留后,通常需要淋洗固定相以洗掉不需要的样品组分,淋洗溶剂的洗脱强度是略强于或等于上样溶剂。淋洗溶剂必须尽量地弱以洗掉尽量多的干扰组分,但不能强到可以洗脱任何一个分析物的程度。溶剂体积可为0.5-0.8 mL/100 mg 固定相。淋洗步骤也能确保全部样品与固定相接触,因为上样时部分样品溶剂的小液滴可能还沾在管壁上,淋洗溶剂可把液滴全部洗入固定相。有时候淋洗步骤也许并不十分重要,但淋洗总能得到更干净的样品,从而得到更简单的谱图和更长的
gc 或HPLC 柱寿命。
洗脱液
淋洗过后,将分析物从固定相上洗脱。洗脱溶剂用量一般是0.5-0.8 mL/100 mg 固定相,而溶剂必须进行认真选择。溶剂太强,一些更强保留的不必要组分将被洗出来;溶剂太弱,就需要更多的洗脱液来洗出分析物,这样固相萃取柱的浓缩功效就会削弱。收集起来的洗脱液可以直接向色谱柱进样,也可以把它浓缩后溶于另一溶剂中进样和进一步净化。