主题:【已应助】C18柱耐水比例求助

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最近打算用C18柱分析两个氨基酸组成的小肽,查了一下文献,基本上衍生化或者用T3和HILIC的居多,有不衍生化并且用C18柱做的,但是流动相水相是从2%开始,我手上只有C18柱,想试一下看看能不能测,所以想请教一下各位大神,如何看C18最大耐水程度?我之前最高只上到95%水相,就没敢再往上加了,看了说明书也没有说柱子最大耐水比例,所以不知道这个应该如何来评判呢?我用的是Thermo家的Accucore C18
推荐答案:hujiangtao回复于2022/02/17
氨基酸极性大、分子量小,很难在c18上保留。C18柱子不适合用纯水作流动相的原因主要是:
(1)当采用有机溶剂作冲洗剂时,由于硅胶的表面高度不均一,即使极微量的水吸附在其表面上时,也会使吸附活性大大降低。尽管水在非极性和弱极性的有机溶剂中溶解度很小,但如此微小的含水量的变化就会导致柱负荷和保留值的显著变化。
(2)C18属于疏水性基团,而疏水性简单说就是容易抱团。C18长链在纯水条件下会抱团,抱团之后就很难再分开,导致柱效下降,因为C18里面被抱团在内部的那一部分就失去作用了,且不容易恢复。
(3)那为什么加一些有机相(比如5%甲醇或乙腈)就可以呢?因为有机相在C18抱团的时候会起到阻碍作用,所以流动相中要加一定量的有机相。
(4)抱团作用(疏水性)和柱子本身有关:一些原来老填料的柱子有的要求水相最多不超过80%,现在的填料进过改进有了能“阻挡抱团”的基团,一般都能耐受95%水相了;此外碳载量高的柱子(如C18)一般更怕水,容易抱团,碳载量低的相对要好一些。
(5)很多公司也推出了能耐受100%水相的C18柱(如安捷伦AQ柱、Waters的T3柱),里面添加了极性基团,抱团作用被有效遏制,所以可以用纯水流动相。
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hujiangtao
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氨基酸极性大、分子量小,很难在c18上保留。C18柱子不适合用纯水作流动相的原因主要是:
(1)当采用有机溶剂作冲洗剂时,由于硅胶的表面高度不均一,即使极微量的水吸附在其表面上时,也会使吸附活性大大降低。尽管水在非极性和弱极性的有机溶剂中溶解度很小,但如此微小的含水量的变化就会导致柱负荷和保留值的显著变化。
(2)C18属于疏水性基团,而疏水性简单说就是容易抱团。C18长链在纯水条件下会抱团,抱团之后就很难再分开,导致柱效下降,因为C18里面被抱团在内部的那一部分就失去作用了,且不容易恢复。
(3)那为什么加一些有机相(比如5%甲醇或乙腈)就可以呢?因为有机相在C18抱团的时候会起到阻碍作用,所以流动相中要加一定量的有机相。
(4)抱团作用(疏水性)和柱子本身有关:一些原来老填料的柱子有的要求水相最多不超过80%,现在的填料进过改进有了能“阻挡抱团”的基团,一般都能耐受95%水相了;此外碳载量高的柱子(如C18)一般更怕水,容易抱团,碳载量低的相对要好一些。
(5)很多公司也推出了能耐受100%水相的C18柱(如安捷伦AQ柱、Waters的T3柱),里面添加了极性基团,抱团作用被有效遏制,所以可以用纯水流动相。
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