主题:【已应助】关于微生物质谱,我有3个问题,求大神解答

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雷霆小子
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1、微生物质谱到底是个啥?
2、质谱为什么能够鉴定微生物?
3、为什么要用质谱做微生物鉴定?
推荐答案:123回复于2023/12/01
微生物质谱分析是一种通过测量离子质荷比(质量-电荷比),从而确定其质量的分析方法,通俗点讲,质谱就是一种类型的“秤”,只不过它称量的是离子的质量,在众多的分析测试方法中被认为是一种同时具备高特异性和高灵敏度且得到了广泛应用的普适性方法。

  微生物质谱仪器一般由进样系统、离子源、质量分析器、检测器、数据处理系统等部分组成。由于进样方式、离子源、质量分析器等的不同,质谱仪分为不同的种类,临床上常见的有液相色谱串联质谱、气相色谱串联质谱、电感耦合等离子体质谱、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等等。

  微生物的分类其实有很多,就拿细菌为例,细菌是原核生物的一类,是一类形状细短,结构简单,多以二分裂方式进行繁殖的原核生物,是在自然界分布广、个体数量多的有机体,是大自然物质循环的主要参与者。细菌主要由细胞膜、细胞质、核质体等部分构成,有的细菌还有荚膜、鞭毛、菌毛等特殊结构。

  之所以能够对细菌进行鉴定,是因为细菌的核糖体蛋白具有保守性,一般不会随生长条件的变化而变化,而不同细菌的核糖体蛋白指纹图谱具有各异性,指纹图谱中的某些峰具有属、种,甚至亚种特异性。
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微生物质谱分析是一种通过测量离子质荷比(质量-电荷比),从而确定其质量的分析方法,通俗点讲,质谱就是一种类型的“秤”,只不过它称量的是离子的质量,在众多的分析测试方法中被认为是一种同时具备高特异性和高灵敏度且得到了广泛应用的普适性方法。

  微生物质谱仪器一般由进样系统、离子源、质量分析器、检测器、数据处理系统等部分组成。由于进样方式、离子源、质量分析器等的不同,质谱仪分为不同的种类,临床上常见的有液相色谱串联质谱、气相色谱串联质谱、电感耦合等离子体质谱、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等等。

  微生物的分类其实有很多,就拿细菌为例,细菌是原核生物的一类,是一类形状细短,结构简单,多以二分裂方式进行繁殖的原核生物,是在自然界分布广、个体数量多的有机体,是大自然物质循环的主要参与者。细菌主要由细胞膜、细胞质、核质体等部分构成,有的细菌还有荚膜、鞭毛、菌毛等特殊结构。

  之所以能够对细菌进行鉴定,是因为细菌的核糖体蛋白具有保守性,一般不会随生长条件的变化而变化,而不同细菌的核糖体蛋白指纹图谱具有各异性,指纹图谱中的某些峰具有属、种,甚至亚种特异性。
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微生物质谱仪是利用质谱技术对微生物进行检测的仪器。其原理是首先将微生物样品进行离子化,然后通过质谱仪分析离子的质量和数量,进而确定微生物样品的成分和组分。 具体来说,微生物质谱仪通常使用 MALDI-TOF 质谱技术(基质辅助激光解吸电离时间飞行质谱),即先将微生物样品涂在一个基质上,然后用激光将基质加热离子化,生成离子化的微生物分子。这些离子会在一个带有质量分选器的管道中被加速和分离,根据它们质量-电荷比的不同在不同位置被聚焦,最后落在检测器上产生电荷信号,从而确定微生物样品的质量和数量。
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当前有2种方式的整合多组学用于精准医学研究:一是根据已知的分子通路和机制,分析各种检测到的分析物包括转录产物、蛋白质、代谢物等。该方法需要预先了解疾病发生过程的一些关键分子通路,从而将各种组学研究发现的信使RNA、蛋白质、代谢物、非编码RNA、长链非编码RNA、遗传序列变异体、DNA 甲基化和组蛋白甲基化变体与这些分子通路关联。二是首先分析各种组学数据的关联度,由此发现在各种组学研究中关联度高的分子。该方法的优势是能够发现新的与疾病过程相关的分子和通路,其挑战是各种组学数据量的不对称性。随着多组学发展日趋成熟,其将成为医学检验和精准医学领域的主要研究平台并由此发现全新的疾病早期诊断标志物、预后监测标志物,从而制订高效个性化精准治疗。3、临床质谱的自动化和信息化 对于临床诊断而言,质谱相对于传统技术的主要优势包括开发速度快,可同时测定单个样品中的多种分析物,单次测定成本低,特异性高,适合小分子分析物测定。但也存在仪器成本较高,操作复杂,学习周期长,缺乏技术人员等问题。不同的生物基质前处理方法不同,样品中遇到的蛋白质、盐和脂质水平较高,需要特殊的仪器设备,实现自动化难度较大。质谱仪器产生的数据量大,一般不能直接与现有的实验室(检验科)信息系统进行数据交互,需要专业的技术人员通过厂商软件处理数据后才能转化为临床检验可报告的结果,这也是限制质谱技术在临床推广的又一因素。质谱仪器系统较为复杂,对实验室技术人员的能力要求远高于常规医学检验系统,加之业内缺乏系统学习和相关技术背景人才储备,从事临床质谱技术人才的市场缺口较大。这些因素都是目前质谱技术在常规临床诊断工作流程中应用相对有限的原因,所以实现临床质谱的自动化和信息化、加快人才培养才能更好地推动质谱技术在临床检验中的应用。尽管面临质量管理和量值溯源,以及标准化等诸多问题,但通过各方面努力,临床质谱技术正在朝着自动化、小型化、人工智能识别模式化等方向发展,质谱技术在实现精准检测方面有着强大的潜力和优势。生命科学研究的重心逐渐转向基因功能,即由测定基因的DNA 序列、解释生命的遗传信息转移到鉴定有生物学功能的蛋白类分子、探索人类健康和疾病奥秘的多组学研究中。临床质谱检验正进入到基因组学、蛋白质组学、代谢组学等多组学整合分析阶段。贯彻和执行国家精准医疗战略,推动临床质谱技术应用的规范化、标准化,引领中国临床质谱产业的发展,更好地服务于检验医学,为人类健康事业做出更多的贡献,是医学检验人员面临的重大机遇。
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质谱目前应用在微生物检验上的为时间飞行质谱。

      原理为:激光激发靶板上的细菌与基质让细菌的蛋白在真空的飞行管中。检测器通过检测蛋白飞行时间的不同来建立一个曲线图谱进而与数据库中的信息比对,得出可能的菌的种。

        结果解读:目前微生物室使用的质谱都为此类,结果一般按照系统比对情况按照评分列出名单,一般为评分最高的最有可能(但要保证评分1.5/1.6以上才可取用,且评分规则为国际上的标准)。

作者:帕拉迪牧
链接:https://www.zhihu.com/question/49633575/answer/152388086
来源:知乎
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质谱优缺点:

    优点:操作简单,实验时间短,大大缩短了一级报告的时间。(BD公司给出的数据为全程20分钟即可,且符合实际操作结果。)

    缺点:质谱归根结底为检测的蛋白质图谱。所以像大肠和志贺…此类都鉴定不好。

    其他方面:因此设备极贵,更应注意设备在使用中的硬件耗材及常规耗材成本。
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