液相色谱柱也被称为
液相色谱的“心脏”,是分离效能的核心部分,那么日常的冲洗对提高实验效率、降低实验室成本都有重要意义。日常使用过程中如果出现如下几个情况,就需要对色谱柱进行清洗(本文主要适用反相色谱柱):
1、 柱压高;
2、 分离效能降低;
3、 峰变形;
4、 柱效降低;
5、 柱子存储一段时间。
液相色谱柱厂家说明书里面推荐的冲洗步骤,经常看到用某溶剂冲洗10倍柱体积,那么柱体积如何精确计算呢。公式(见附件)太比较复杂
根本算不出来有没有,有没有!OK,没有问题。降低难度,直接查下面这个表就OK了 Column Dimension | Column Volume |
4.6 mm I.D. x 250 mm L | 4.2 mL |
4.6 mm I.D. x 150 mm L | 2.5 mL |
4.6 mm I.D. x 50 mm L | 0.8 mL |
3.0 mm I.D. x 250 mm L | 1.8 mL |
3.0 mm I.D. x 150 mm L | 1.1 mL |
3.0 mm I.D. x 50 mm L | 0.4 mL |
2.1 mm I.D. x 150 mm L | 0.5 mL |
2.1 mm I.D. x 100 mm L | 0.3 mL |
2.1 mm I.D. x 50 mm L | 0.2 mL |
确定好冲洗体积,下一步为了明确冲洗的原理,把冲洗溶剂极性表(见附件)附一下:
在下面把安捷伦、岛津、WATERS三大主流品牌推荐的
反相液相色谱柱冲洗条件汇总(同规格的其它品牌柱子都可以借鉴使用),具体如下:
安捷伦推荐冲洗条件:
1、断开色谱柱与检测器的连接,将清洗溶液排入烧杯;
2. 先使用不含缓冲盐的流动相(水/有机溶液)。冲洗 10 到 20 倍柱体积;
3. 接下来用 100% 有机溶剂(甲醇或乙腈);
4. 检查压力是否已经恢复正常,如果没有则进行第5步骤;
5. 丢弃色谱柱或考虑采用更强的条件,如75% 乙腈/25%异丙醇;
6. 选用 100% 异丙醇、100%二氯甲烷或 100% 己烷(如果您采用二氯甲烷或己烷,需在使用前以及返回到反相流动相之前用异丙醇冲洗色谱柱)
备注:对于填料颗粒小于1.8μm的色谱柱,不要反冲色谱柱,应更换色谱柱。
岛津推荐的冲洗条件:
1、先试用含
5-20%溶剂(甲醇、乙腈等)的水溶液(5倍柱体积)冲洗,流速:1.0 mL/min(下同);2、用
100%溶剂(甲醇、乙腈等)冲洗(5倍柱体积);3、用
100%溶剂(四氢呋喃、异丙醇等)冲洗(10倍柱体积);4、重复步骤2;5、重复步骤1;6、使用工作流动相替换溶剂。WATERS推荐的冲洗条件:
1、先移除预柱;
2、应使用色谱级试剂冲洗(20被柱体积);
3、如果是使用的极性样品进样,应依次使用如下溶剂冲洗:水、甲醇、四氢呋喃、甲醇、水、流动相;
综上3家
液相色谱柱厂家推荐的条件,相信大家对反相
液相色谱柱的冲洗有了全面的了解,当然如果冲洗解决不了的情况就可以考虑柱子修复,修复就是要打开色谱柱进行“手术”了,胆大心细当然经验也很重要哈!