主题：【讨论】大家帮忙看看我这个分子量小于10000的混合小肽检测方法有什么问题

谢谢各位的指点。

这段时间一直在查找资料，并且作了一些预试验，准备对我们的检验方法进行修正。现在我的大体思路如下，请大家继续帮忙分析，我的试验还没开始，害怕试验方案有方向性错误，白作无用功。
我的试验方案根据检测目的分成两部分试验：

试验方案1：
分析目的：只检测样品中肽类物质的分子量分布。作为产品分析方法。
试验调整方向：
在现用色谱条件的基础上加以优化，主要方向是调整一下流动相比例和流速，同时选择一下进样量。前提是能够有合适的流动相比例，即能全溶样品中的肽又能使标样有很好的分离度。
我的初步想法：
  根据预试验：前几天标准品的分辨率变低，最后面的两个峰有点分不开，所以我将流动相中三氟乙酸的比例加大了一点，发现标准品的分离度比以前还要好。
  然后我又试着调整了一下流动相中乙腈和水的比例，用10：90；20：80分别走了一下标准品，发现分离效果不行，后边的3个小分子标样分不开。但是用20：80的比利时，我加大了一下流速，发现标样的分离度有变好的趋势。
  由此我试着总结了一下：就象上面lxdongzi2003说的，这个方法分离中除了分子筛效应，应该还有有机相的极化效应在起作用。而三氟乙酸在流动相中起到的作用，应该是中和部分蛋白和肽分子中的电荷，适当减轻极化效应的分离效果。同样加大流速后小分子标样的分离度变好应该也是这个道理：流速增大，适当程度的减轻了极化效应，从而使小分子部分分子量很接近的三个标样得到较好的分离。

查资料得知，标准品就是大豆蛋白酶解物中能够产生的物质，所以应该不用考虑标准品性质和样品性质差异太大，从而在利用有机相的极化效应分离方面导致的gpc计算结果有太大偏差的问题。

检测器如果只检测肽类物质的话，用紫外也还勉强可以接受，不过要考虑浓度导致的响应值问题。

这样看来，只要找好流动相比例，做到能全溶样品中的肽，再把方法其他细节方面优化一下，用来测定样品中肽类分子量分布，应该还是可以的。
因为有行业标准，所以在没有得到更为准确的

试验方案2：
试验目的：检测该样品中全部成分的分子量分布情况。
试验方向：
    这种目的下，就象大家分析的这样，现在的方法肯定要全盘否定，重新再来。
    第一步，我先用现在的柱子（能不换尽量不换，我刚刚又买了一根新的呢），不过检测器会改为示差，到时两个检测器一起采集数据，处理后分析差距。
    流动相因为要排除极化效应，乙腈肯定不用了，按照大家说的，试着换用缓冲盐看看。这两步还不行再考虑其他的比如换柱子。。。
第二步：准备找家有能力作光散射分子量分布的，看看能不能做出绝对分子量分布，这样下一步试验就有比对了。

我下一步就要试验了，过程中的问题还要随时向大家请教，先说声谢谢啊。。

楼主，请问你们的标样是从哪里定的？恳请回复

原文由 wyyjade 发表:
楼主，请问你们的标样是从哪里定的？恳请回复

不好意思，忙于另外一个实验加上放假，很久没有来了。
我们的标样是从天津一家公司进的，不过买的时间比较早了，快3年了，所以我也不知道他们现在还有没有现货。
如果你还没有买到我可以帮你打听一下联系方式。

我也想知道标样是在哪里买的呢？

你好 不知楼主还在做肽类分子量分布吗 我正在做这方面研究 但苦于无处购买标准品 请赐教

楼上的弟兄，我现在也想做这方面的东西，多交流，我的邮箱：zyd1982@yahoo.cn

我也有个问题想问问楼主或者各位前辈，就是多肽标准样品应怎样选择，比如说我要测小于100Da的、100-1000、1000-5000的等等，那我就要选100、1000、5000Da左右的三个标样吗？还是随便选几个，然后做标准曲线呢？期待你们的解答，非常感谢！

大家好！我是做大豆肽制备的，也需要测定其分子量分布范围和含量，按照GB/T22492-2008附录A买了装备，但是标准品不知道该怎么买，买哪的好，请指教。