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毛细管电泳（CE）
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主题：【求助】聚丙烯酰胺涂层

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protein_girl
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发表于：2007/11/19 18:16:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
大家好！我做毛细管的线性聚丙烯酰胺涂层已经有几个月了，但是丝毫没有什么进展，而且失败到了我快要不能接受的程度了！
    刚开始做的两根管子，电渗抑制了一点点，柱效又很差，本想改善一下涂层方法，提高柱效，岂料不但柱效没有提高上去，现在连峰都没有了，无论我进什么样的样品（大分子，小分子，中性的，带电的），都没有任何峰出现，现在成了一个大小通吃的“魔鬼”毛细管，即使我按照原来柱效差的方法做也一样没有任何峰。小妹我做了将近几十根管子，都是如此，和老板讨论，老板说是管子没有老化，但是我老化之后，状况依然（也可能是我老化的方法不对头）。我实在是没有办法了，做涂层管只是我的一个辅助的步骤，我是做蛋白质分析的！但是现在没有涂层柱，我没有办法继续我的蛋白质分析！今天作为一个新手，来到这个板块向大家求助，希望大家能够帮助我解答我的疑问，小女子不胜感激！

这是我涂层的步骤，希望大家能够给我指点，也希望能给朋友们些借鉴：

1.  1M NaOH 1h,H2O 1h ,0.5M HCl 1h,H2O 1h ,N2吹干

2. 2%MAPS(是3-（trimethoxysilyl)propyl methacrylate吗？因为经历了这么多次失败，我已经开始怀疑自己的药品了)+48%乙腈+50%乙酸，室温反应过夜，乙腈冲洗，N2吹

3. 3%丙烯酰胺+3uL 10%TEMED+3uL 10% APS,反应过夜，水洗，N2吹(除氧，并在N2氛围中操作）

如果大家能够帮助我，改进我的实验方案，希望能够与我联系，谢谢！
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