图7:530 QD-MBP-Cy3-®-CD-Cy3.5传感器的功能和性质示意:a表示了530QD-MBP-Cy3-®-CD-Cy3.5 maltose 传感器的结构。一个530-nm QD被大约10个MBP环绕。(只画出了一个)每一个MBP在唯一的cysteine 95位点结合Cy3(最大吸收峰556NM,最大发射峰570NM)在糖结合位点特异结合的CD-Cy3.5(最大吸收峰575NM,最大发射峰595NM),构成完整的纳米传感器。激发QD后由第一步FRET作用MBP-Cy3被激发,它的发射光再由第二步FRET激发CD-Cy3.5,加入麦芽糖后竞争性替换了®-CD-Cy3.5,阻断了第二步FRET,引起Cy3的发射增强。b 530QD-MBP-Cy3-®-CDCy3.5的光谱特性,530 QD 的吸收光谱用品红表示,发射光谱用兰色表示。MBP-Cy3的吸收光谱绿色表示,发射光谱黄色表示。®-CD-Cy3.5的吸收光谱橙色,发射光谱红色。c.530QDs 在MBPD95C-Cy3/未标记的MBP比率逐渐增大时的光谱特征。
除了以上的应用外,FRET还在其他一些方面得到运用,如:实时PCR实验和SNP检测、核酸分子杂交、引物延伸实验检验基因突变、自动基因测序、类脂的转运和分配、膜融合实验和膜电位测定、荧光蛋白酶底物、CAMP指示等多方面的研究。
在FRET技术不断改进的同时,各种有着优异性能的荧光素也相继推出,仅就GFP来说,由GFP到它的各种突变体,如CFP、YFP,到后来的改进的ECFP、EYFP等,最近又有Mark A Rizzo18 等人将ECFP进一步改进为Cerulean,ECFP的缺点是低的量子产率、低淬灭系数和短荧光寿命,只适合于二次幂处理。为提高ECFP在FRET中的性能,他们用位点特异突变的方法将它改进为Cerulean(ECFP/S72A/Y145A/H148D),后者的量子产率大大提高,亮度比ECFP高2.5倍,淬灭系数和荧光寿命也更长了,适合一次幂处理并且提高了信噪比。可以在FRET中发挥更好的作用。