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主题：【已应助】【求助】UPLC-MS/MS，平行操作，样品峰面积不一样

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i_maple
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发表于：2008/01/24 21:35:10 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
UPLC-MS/MS做某个药的血浆样品，换了N种提取溶剂，每次都是平行操作做两个样品，结果每次这两个样品的峰面积都不一样，咋回事啊？

做标准品的时候，线性能做出来，应该不是质谱的事，大家帮忙分析下。

提取溶剂试过了二氯甲烷、甲基叔丁基醚、乙醚等等，以及混合提取，氮气流吹干，流动相溶解，斡旋、离心，过0.22滤膜，然后才进针。

每次两针之间都差挺多，不一定，有时另一个都不出峰，就是这样，帮忙分析下，另外柱子我也换过了、也试过甲醇沉淀蛋白二次提取，都不行。

会不会和uplc这种小柱有关呢

郁闷。。。。。
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2008/1/24 22:42:58 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如果你的柱子是新的，问题不大！因为我们一直使用这种小柱，每根基本上都能分析上万个生物样品。至于你提到的这个问题，在血浆样品中出现也是正常的，这就要求你在进行条件摸索时，至少平行做3份样品，然后看她们的平均值，来确定哪个条件更适合。当你确定你的最优条件后，只要线性跟准确度精密度能符合要求就是可以的！
Good luck!
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Last edit by dickwang2008
i_maple
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2008/1/25 10:31:17 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
二者峰面积不是差一点，有时候是差十几倍到几十倍
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2008/1/25 11:22:59 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
同一份进针重现性很好的

难道空气中到处都弥漫着我的药！！！！！！
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wshx
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2008/1/26 12:08:37 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我在做某含有羟基的样品是峰面积是越做越小，而另一化学性质很稳定的化合物则重现性很好，现在不知这个问题是否和样品本身化学性质有关，

楼主是否用了缓冲盐，用盐的话由于有离子抑制峰会越来越小
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eleanor
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2008/1/30 21:54:45 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用internal standard 吗？
或许萃取的时候，会有流失呢，，
而且听说，有些带苯环的化合物，，用氮气吹会容易流失...
相信不是uplc 的问题，，， 要不是你的matrix 有干扰....
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flyaway
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2008/2/14 9:14:58 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 i_maple 发表:
同一份进针重现性很好的

难道空气中到处都弥漫着我的药！！！！！！

那明显就是前处理的问题了。
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libing111
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2009/2/4 14:35:18 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
测6个样RSD在10%左右就没有问题
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sonickurt
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2009/2/4 16:10:14 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
同一个样重现性很好  平行样差别大    证明应该不是仪器的问题
你实验了很多次 每次都不一样 个人认为有两个原因 要么你有个细节没注意  比如滤膜没换  进样瓶没换之类的 还有个可能就是 你前处理过程中有个能损失样品的操作  每次操作不同导致每次检验结果
还是多做 慢慢摸索 
good luck
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zhufangwei
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2009/2/5 17:42:11 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你说两个平行样所得峰面积不一样不是很正常的吗，提取过程有偏差，你说这两个峰面积相差的太大，我就想知道一下，你一个样重复进样没有，一个样品同时进两针峰面积差异大不大，你走溶剂没有，标样什么的，都怎么样，试过没？？？
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sally98
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2009/2/5 21:38:58 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 i_maple 发表:
UPLC-MS/MS做某个药的血浆样品，换了N种提取溶剂，每次都是平行操作做两个样品，结果每次这两个样品的峰面积都不一样，咋回事啊？

做标准品的时候，线性能做出来，应该不是质谱的事，大家帮忙分析下。

提取溶剂试过了二氯甲烷、甲基叔丁基醚、乙醚等等，以及混合提取，氮气流吹干，流动相溶解，斡旋、离心，过0.22滤膜，然后才进针。

每次两针之间都差挺多，不一定，有时另一个都不出峰，就是这样，帮忙分析下，另外柱子我也换过了、也试过甲醇沉淀蛋白二次提取，都不行。

会不会和uplc这种小柱有关呢

郁闷。。。。。

滤膜应该可以不用过，否则损失太大。涡旋后高速离心即可，12000rpm，10min，取上清进样，楼主可以试试看。
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