三、原 理
色谱法的分离原理是:溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过流动相时,由于与固定相(stationary phase)发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同,在流动相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出。
高效
液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法(正相与反相)、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。
四、使用范围
高效
液相色谱法适用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定易分解的、分子量大、不同极性的有机化合物;生物活性物质和多种天然产物;合成的和天然的高分子化合物等。它们涉及石油化工产品、食品、合成药物、生物化工产品及环境污染物等,约占全部有机化合物的80%。其余20%的有机化合物,包括永久性气体,易挥发低沸点及中等分子量的化合物,只能用
气相色谱法进行分析。
五、 操作步骤
1. 600泵的操作步骤:
a. 600泵的启动
600泵接通电源后,首先运行自检程序,通过自检后,显示初始屏幕。初始屏幕显示:型号,版本号等,并显示下一步操作的提示键。
*开机顺序
检查600泵的电路,流路和氦气已按要求正确连接。
确认氦气减压表在50-90psi间。
接通电源。
通过自检后,氦气脱气操作。
按setup键,进入设置窗口
移动光标至流动相脱气区(瓶号:ABCD)
按1键和enter键,打开相应流动相瓶号的氦气开关
在此窗口中还可设置温度和压力上下限范围
移动光标至相应操作区,用数字键输入数值,按回车键确认
按direct键,进入isocratic窗口
移动光标至氦气流速sparge区
按数字键输入数值,并以enter键确认。
刚开始时通常以100ml/min, 脱气15 分钟。平衡后,可根据流动相的不同而降低氦气流速。
*抽液操作
移动光标键至组分区new composition
在A下方,键入100,enter键
其他组分(BCD)下方键入0,enter键
将抽液阀inlet manifold valve旋至draw位
用针筒抽A液10ml,将抽液阀旋至run位
重复以上操作分别抽取B,C,D液10ml。
*冲洗操作
移动光标键至组分区new composition
在A下方,键入100,enter键
其他组分(BCD)下方键入0,enter键
旋开参比阀reference valve
移动光标键至流速区flow rate
设置流速为10ml/min: 键入10,enter键
将抽液阀旋至draw位用针筒抽液10ml
将抽液阀旋至inject位,并推出针筒中的液体
将抽液阀旋至run位。此时参比阀排出的液体应连续,如不连续则重复以上抽液排液操作。
将流速减小至0.2ml/min
将参比阀关闭。