原文由 gaona306 发表:
大家好,请教各位一个问题:
文献报道,考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,最大光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。
但我按照文献配制的G-250(0.1mg/mL)是紫色的,用紫外光谱检测时超出量程,所以用二次水稀释一倍,检测其最大吸光度值,不在488nm,将其和一定浓度的牛血清白蛋白结合,发现其颜色并未变成青色,吸光度也不在595nm,而是随着蛋白浓度的增加红移。实验现象与文献完全不同,不知道是哪里出错了,请教各位!
很着急,请知情人解答疑惑,万分感谢!
原文由 ydwhd 发表:原文由 gaona306 发表:
大家好,请教各位一个问题:
文献报道,考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,最大光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。
但我按照文献配制的G-250(0.1mg/mL)是紫色的,用紫外光谱检测时超出量程,所以用二次水稀释一倍,检测其最大吸光度值,不在488nm,将其和一定浓度的牛血清白蛋白结合,发现其颜色并未变成青色,吸光度也不在595nm,而是随着蛋白浓度的增加红移。实验现象与文献完全不同,不知道是哪里出错了,请教各位!
很着急,请知情人解答疑惑,万分感谢!
我们遇到过同样问题,不同厂家的试剂效果不一样。换试剂试试