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分子荧光光谱

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主题：【求助】问一些初级的问题

浏览0 回复2 电梯直达

chempig

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发表于：2008/03/13 07:37:36 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我原来做化工的，转为分析，很多不懂，特请教专家们：
测定一个未知物的荧光强度时，1.是先固定激发波长，测定发射光谱，然后以最大发射光谱，做激发光谱，找出最大发射光谱吗？2.测定荧光强度是否要空白？3.仪器如何用标准校正。
请专家指教，谢谢。

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2008/3/27 21:01:02 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

应该先做三维扫描

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aqguochang

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2008/4/15 12:33:29 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

（1）如果你的仪器有三维扫描功能，那就非常简单了，按照说明书要求去做就可以了。
（2）如果仪器没有上述功能，一般可将仪器的激发波长(EX)先设定为200nm，然后进行发射波长(EM)模式扫描，(EM)波长范围暂设定为210－800nm，然后记录所有出现的峰值波长；改变激发波长(EX)后再扫描，如第二次发射图谱中的某个（或某些）峰的位置没有位移（或位移很少），一般来说这个（或这些）峰就是荧光峰；因为荧光峰的位置是不随激发波长的改变而改变的，仅是峰高（或峰面积）发生改变
（3）将确定的荧光峰的波长作为发射波长(EM)固定下来，再做激发波长(EX)的扫描，激发波长的范围要小于发射波长（根据斯拖克斯定律）；如果仅出一个峰则很简单确立下来，再将这个波长固定下来重新做真正的发射波长(EM)扫描，可以得到良好的信噪比的结果值；如果做激发波长(EX)扫描后出现几个峰，则需要有经验的选择了，一般选择峰形高度适合并又有一定带宽的峰为激发波长。
我想再补充一点,如果固定发射找到多个激发的话,也可以参考荧光光谱的特性-------激发和发射呈镜象的特点来确定激发波长.

我也是新手！引用网上相关资料，希望能对你有所帮助！

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