主题：【原创】固相萃取(SPE)应用实例汇集(3)---每天一例

水产品中孔雀石绿固相萃取净化方法1. 样品前处理
称取5.00g切碎的样品，依次加入1mL盐酸羟胺(0.25g/mL)溶液、2mL对-甲苯磺酸(1.0mol/L)溶液、2mL乙酸铵缓冲溶液(0.1mol/L)和40mL乙腈，匀浆2min (10000r/min)，离心3min(3000r/min)，将上清液转移到250mL分液漏斗中，用20mL乙腈重复提取残渣一次，合并上清液。于分液漏斗中加入30mL二氯甲烷、35mL水，振摇2min，静置分层，收集下层有机层，再用20mL二氯甲烷萃取一次，合并二氯甲烷萃取液，45℃旋转蒸发近干。
2. SPE净化
a. 活化：PRS柱，依次用3mL乙腈、3mL甲酸溶液活化；中性氧化铝柱，用5mL乙腈活化；
b. 上样：将中性氧化铝柱AL-N串接在PRS柱上方。用6mL乙腈分三次(每次2mL)用旋涡震荡器涡旋溶解上述提取物，并依次过柱，控制柱流速不超过0.6mL/min；
c. 淋洗：再用2mL乙腈淋洗中性氧化铝柱后，弃去中性氧化铝柱。依次用3mL 2%(v/v)甲酸溶液、3mL乙腈淋洗PRS柱，弃去流出液；
d. 洗脱：用4mL5%(v/v)乙酸铵甲醇溶液洗脱，洗脱流速为1mL/min，用10mL刻度试管收集洗脱液，用水定容至10.0mL，样液经0.2μm滤膜过滤，待测。
3. HPLC-MS/MS检测
液相色谱-串联质谱条件
a) 色谱柱：Pursuit C18柱，50mm×2.1mm×3μm；
b) 流动相：乙腈：5mmol/L乙酸铵(75:25, v/v)；
c) 流速：0.2mL/min；
d) 柱温：35℃；
e) 进样量：10μL；
f ) 离子源： ESI，正离子；
g) 扫描方式：多反应监测MRM。
4. 样品组分
孔雀石绿、氘代孔雀石绿、结晶紫、氘代隐色孔雀石绿、隐色孔雀石绿和隐色结晶紫

本方法中使用的SPE柱：
Bond Elut PRS(500mg,3mL, PN.12102039)和Bond Elut AL-N(1g,6mL, PN. 12256086 )。

Tips:
本方法满足国家标准关于水产品中孔雀石绿检测的要求！