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主题：【求助】高效液相荧光检测氨基酸遇到的问题

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wudaotianshi17
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发表于：2008/07/15 22:28:05 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我用安捷伦1200做氨基酸的柱前衍生，用的衍生液为OPA，要测量Asp，Glu，Gly，Tau，GABA五种氨基酸。这几天在调整增益的时候发现样品位置换为纯水，加衍生液反应时在氨基酸保留时间处仍然会出峰，和要测量的氨基酸重合性很好，怀疑是污染，但是清洗了系统，换了新的水和衍生液后仍然有峰，单进衍生液也可以出峰，都是在氨基酸保留时间处，但纯水没有峰出现，请问大家还有什么可能原因？困惑中
我的流动相：A:乙酸钠：甲醇：四氢呋喃（400：95：4）
            B：乙酸钠：甲醇（120：380）均为体积比
梯度：0min： 0%B
      0-10min：63%B
      10-12min：63%B
      12-12.01min：100%B
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2008/7/15 23:09:33 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可能原因:1、每次进样完是否有洗针，可能进样针会殘留有样品。
        2、你的纯水的质量有问题。
        3、操作中的问题，人的汉水、唾沫等当中都含有氨基酸的。
所以每次进完样后多洗下针、换水、注意操作。
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Ty
tianyu19850402
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2008/7/16 10:33:36 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 wudaotianshi17 发表:
我用安捷伦1200做氨基酸的柱前衍生，用的衍生液为OPA，要测量Asp，Glu，Gly，Tau，GABA五种氨基酸。这几天在调整增益的时候发现样品位置换为纯水，加衍生液反应时在氨基酸保留时间处仍然会出峰，和要测量的氨基酸重合性很好，怀疑是污染，但是清洗了系统，换了新的水和衍生液后仍然有峰，单进衍生液也可以出峰，都是在氨基酸保留时间处，但纯水没有峰出现，请问大家还有什么可能原因？困惑中
我的流动相：A:乙酸钠：甲醇：四氢呋喃（400：95：4）
            B：乙酸钠：甲醇（120：380）均为体积比
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应该是你的衍生液被污染了，纯水有没有被污染不好说，因为单进纯水而不加衍生液的话肯定是不会出峰的
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wenyu689
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2008/7/18 8:33:37 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主说清洗系统，是怎么清洗的？
阀和针都洗了吗？
根据我的经验，高灵敏度检测方法（荧光法属于高灵敏度）换样品时，需要把针和阀好好清洗。
要判断是阀还是针污染，只要不进样，空转阀看看有没有峰出来。如果有，就是阀污染，否则针污染。
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风烟
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2008/7/18 9:11:09 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我们也检测氨基酸，也用OPA衍生，但就是柱后衍生。
我感觉您的衍生液有问题，您检查一下衍生液所用的水啊什么的吧……
欢迎以后常来……我还是第一次遇到与我们检测相同物质的呢，希望您的问题早日解决……
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wudaotianshi17
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2008/7/18 22:04:24 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢楼上几位的帮助！我清洗系统就是用进样程序进水，后来进的水和异丙醇，最后进的是水和甲醇的混合液，直接进过空气，在后运行时间出了峰。纯水是所里的制水机制的，质谱也用这个水，据他们比较说水比屈臣氏和娃哈哈的都好，但不知道对氨基酸检测会不会有影响。楼上说OPA柱后衍生是怎么做的，稳定吗？我也是头一次接触液相，对测氨基酸更是知道的不多，请大家多帮忙啊！谢谢谢谢！
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风烟
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2008/7/19 8:52:00 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 wudaotianshi17 发表:
谢谢楼上几位的帮助！我清洗系统就是用进样程序进水，后来进的水和异丙醇，最后进的是水和甲醇的混合液，直接进过空气，在后运行时间出了峰。纯水是所里的制水机制的，质谱也用这个水，据他们比较说水比屈臣氏和娃哈哈的都好，但不知道对氨基酸检测会不会有影响。楼上说OPA柱后衍生是怎么做的，稳定吗？我也是头一次接触液相，对测氨基酸更是知道的不多，请大家多帮忙啊！谢谢谢谢！


就是在柱子后面加个反应装置，把衍生剂（OPA）按过量输送进去，与分离开的氨基酸反应，再一起流过检测器。我们这个方法用了有十多年了，还算稳定。
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