主题：【讨论】如何去除内毒素

本法用于去除实验用玻璃器皿上的内毒素。将玻璃器皿置于烤箱中，加热到250℃，持续30min，即可去除内毒素。

方法与步骤
1、内毒素去除效率的评估
（1）制备浓度分别为1000和1000EU/mL的CSE溶液。按内毒素测量方法检测这些溶液。
（2）向所有待去除内毒素的玻璃器皿滴入1mL的CSE溶液。（每种类型的玻璃器皿至少有3EU的CSE）。
（3）将玻璃器皿置放烤箱中，在60℃下，干烤持续30min，烘干，然后在烤箱中，250℃下，干烤30min。
（4）加入适量的LAL水，剧烈振荡5min，以清洗玻璃器皿，然后测量清洗后的LAL水中的内毒素的浓度。

（5）比较原来的内毒素含量和现存的内毒素浓度。
当内毒素含量至少减少了3—log时，该方法有效。必要时，重复操作，去除内毒素。用鲎度验法计算内毒素去除的百分比。
2、去除实验玻璃器皿上的内毒素
确定可使内毒素玻璃器皿上的内毒素
对于用来配置无同一内毒素溶液的玻璃器皿，重复操作，直至内毒素含量下降3—log。
（例如，1000    IEU和10000    10EU）
数个加热循环后，用前述的鲎试验法，测定内毒素含量。
3、对照
阴性对照：用只盛有LAL水的玻璃器皿，在250℃下，干烤30min并用LAL法测量内毒素的含量。
阳性对照：干燥（60℃，30min）每种玻璃器皿中的内毒素溶液，不经过干烤（250℃，30min）去内毒素的操作，然后测定其内毒素质量。

质控与提示
（1）保烤箱散热均匀，为此，在操作过程中，可将玻璃器皿放置在烤箱中的每一层上，当温度在250℃后，温度的波动不要超过±15℃。
（2）用含100EU的内毒素过行的检测，可用来确定去内毒素的效率。用含10000EU的内毒素进行的检测，可用来确定对内毒素含量较高的器皿去除内毒素的效率。
（3）如果如果不理想，可增加每一次操作的时间 和操作次数。
（4）其他技术适用于培养基的内毒素，例如，超滤，反向渗透，但比较昂贵。选取有效的滤过膜，确保去内毒素后，培养基的营养成分不丢失并且内毒素含量下降3—log。

不是很懂，不过看来楼主对内毒素的除去方法和验证，也学习到了些皮毛。。。
帮你 顶起来吧呵呵

如果是医药类的产品，内毒素基本上都是要考虑的，不然注射到人体会有反应的。

如果是外用的就可以不用做了。
比如俗称“狗皮膏药”的膏药类，就可以不用关心内毒素了。

原文由 hmzhou83 发表:
做蛋白质的分离纯化，因为是要申报药检的，因此需要内毒素达标，但是分离纯化中受到比较多的因素影响吧，比如空气，Buffer等等，导致纯化下来的蛋白内毒素总是不达标。

不知有没有版友有相关的经验啊？

如果是做药，是不能在一般实验室操作的，这个对生产的环境有一定要求。
还有就是生产过程中所要使用到的各种仪器，包括分离纯化用到的介质，溶液中的各种试剂，在使用之前都要除内毒素的。所以说决不是一个环节的事情。

原文由 hmzhou83 发表:
如果是医药类的产品，内毒素基本上都是要考虑的，不然注射到人体会有反应的。

那是的，需要有像楼主这样会主动思考的人来研究哇

不太懂 因为我对这方面不熟悉

在用干热法去除内毒素时，要注意，在超过100度前，最好能确认被加热的器皿没有水珠在上面，否则会有玻璃器皿破损的。

用干热除去内毒素的条件，除了用250度半个小时，还可以用180度2个半小时的方法。

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生物技术药品分离纯化过程中内毒素的去除