主题：【求助】用分光光度计老是提到以水为参比 它的作用就是调零的吧？？？

不是一样的.如果显色时试剂带有颜色,则应用试剂空白调零.如果全程试剂空白无色,或需要检验一下试剂的纯度和好坏,则应用纯水空白调零为宜.
纯水空白,试剂空白,全过程空白,这三个概念理论上是不一样的.

我是菜鸟 没看懂能否举个例子呢

有纯蒸馏水空白，试剂空白，不加显色试剂空白，他们是不一样的，根据测定时显色物质的不同选择

关于可见分光光度法的参比液的讨论
衷明华
摘  要  根据现行教材在讨论可见分光光度法参比液的选择上存在参比不足或过量的问题，提出了使吸光度能真正地反映被测有色物浓度的参比方法。
关键词  可见分光光度法，参比液
1    问题的提出
可见分光光度法的参比液是用来调节仪器工作零点的，它们的选择原则是使测得的吸光度能真正反映有色欲测物的浓度。现行教材[1~5]在讨论参比液的选择上却不完全符合这一原则，存在着参比不足或过量的问题。
2    问题的讨论
通常在测定的试液（S）里有色欲测物（X），也有无色欲测物（X’），人们就必须在S里加入某些试剂（R），通过显色反应将X’转化为 X。为了保证X’能定量地转化为X，R中的显色剂常常是过量地加入。由于R和S可能有色或者说在测量波长（λ1）处有吸收，因此必须选择适当的参比液来消除R和S的干扰。
⑴.当R和S无色时，它们同H2O一样，在可见光区基本无吸收光谱，故H2O、R、S均可作参比液，教材[1~5]选用H2O作参比是合理的。
⑵.当R有色，S无色时，教材[1~5]选用R作参比液（即先在S中加入适当的掩蔽剂将X’掩蔽起来，然后再按测定x的方法加入R，并以此为参比）。实际上欲测体系中真正过剩的R是随S中X’量的不同而不同，X’量多过剩的R就少，X’量少过剩的R就多。它们的吸收光谱示意图见图1。其中（a）与（b）中的R在λ1下对欲测体系的吸收光谱作用是一致的，R虽然有色，但在λ1处无吸收，故不干扰X的测定，因此，除了可用R作参比以外，亦可用H2O或S作参比；（c）（d）中的R在λ1F下对欲测体系的吸收光谱作用类似，它们干扰的测定。对体系，若用H2O或S作参比，由于欲测体系中的过剩R在λ1下也会有吸收，因此，测量吸光度（A1m）大于真实吸光度（A1m -A1'），即参比不足；若用R作参比，由于欲测体系中的过剩R必定小于参比液的R，因此，测量吸光度（A1m -A1）小于真实吸光度（A1m -A1'），即参比过量。
⑶.当R无色，S有色时，教材[1~5]选用S作参比，同样值得探讨，它们的吸收光谱（见图1）与（2）完全类似，仅R换成S而已。

图1  吸收光谱示意图（H2O参比）
                  曲线1.欲测组分x的吸收光谱
                  曲线2.欲测体系过剩R（或S）的吸收光谱
                  曲线3.R参比液（或S参比液）的吸收光谱
显然，R或S有色（指在λ1处能产生吸收）时，要正确地调节仪器工作零点，准确地出X吸光度，关键在于能否用欲测体系中真正过剩的R或S作参比。这似乎是困难的，但我们可通过再选一根测量波长（λ2）的办法来实现仪器工作零点的正确调节。具体做法是：首先，以H2O作参比在λ1处分别对R或S参比液（其R或S浓度为C1）、欲测体系（其X浓度为Cx，过剩或S浓度为C1’）进行测量，测得的吸光度分别为A1、A1m；随后，仍以H2O作参比在λ2处分别对R或S参比液、欲测体系再一次地进行测量，测得的吸光度分别为A2、A2m。根据比耳定律和吸光度加和性有：
                  A1m = A0 + A1'= K0’bCx + K1’bC1’                    （1）
                      A2m  = A0'+ A2'= K0”b Cx + K1”b C1’                  （2）
                                A1= K1’bC1’                              （3）
                                A2= K1”bC1’                              （4）
式中，K0’、K0”分别为X在λ1、λ2处的吸收系数；K1’、 K1”分别为R或S在λ1、λ2处的吸收系数。
在一定的浓度范围内，R或S在λ1、λ2处的吸光度比值仅与吸收系数有关，与它们的浓度大小无关。即：
                A1/ A2= K1’bC1/ K1”bC1’= K1’/ K1”
            A1’/ A2’= K1’bC1/ K1”bC1’= K1’/ K1”
令：                        A1/ A2= A1’/ A2’= K1’/ K2”=K                      （5）
(1)    式-K*（2）式，得：
△    A= A1m – KA2m =（A0+ A’1）-K（A’0+ A’2）=（A0-KA’0）+（A’1+ KA’2）
= A0-KA’0= K0’bCx - KK0”b Cx =（K0’- KK0”） bCx                          （6）
可见，本文提出的方法（即按（6）式的测量方法）能真正地使测量吸光度反映欲测物的浓度。当然，为了使△A值尽可能地大，灵敏度尽可能地少损失或不损失，λ2应该选在R或S的峰值吸收处或x的吸收的谷底处。

原文由 wuhayahei 发表:
以水为参比是不是其它什么试剂都不加啊，零浓度空白和它有啥区别呢，感觉是一样的啊

以水为参比是不是其它什么试剂都不加啊：是的！
零浓度空白和它有啥区别呢：试剂空白管是指在做标线时与加有标液同步操作。取得消光值同时减掉试剂空白管消光值，那么试剂空白管消光值则为零，故称为零浓度空白。

又学习了，一直以来还真的没关注过纯水和空白作参比的区别

其实我觉得就是吸光度的调零，不管是试剂空白调零，还是为了扣除仪器噪音等进行水调零

我认为理解这个问题时可以抓住最主要的问题，就是一个变量唯一性问题。以水做参比通常是两种情况，一是被测溶液只是某一种被测物质的水溶液。另一种就是被测溶液中除了水和被测物质，还含有其他的溶质，但是这个溶质的量不容易测出或量很少，并且存在后不会影响溶液的透明度和颜色，也就是它的单独存在水溶液的吸光性质跟纯水是一样的。
如果这个溶质的存在使溶液有颜色就会改变吸光性质，这时候就不能用水做参比液了。而要用这个溶质浓度相同的溶液的试剂做参比了。
而零浓度空白应该指的是被测物质的浓度是零，与上面两种情况都不矛盾。

有收获 不过还是有点绕 我再仔细揣摩一下  谢谢大家的指点