主题：【第一届网络原创作品大赛】如何利用LC-MS/MS，更快更好的建立生物样品分析方法?（根据意见和建议，完善后的作品已呈上）

原文由 belek 发表:
楼主在“添加剂的选择”中，写到不要使用三乙胺，但是我在一些文献中看到有用三乙胺做添加剂的，这是为什么？

原文由 dickwang2008 发表:

原文由 belek 发表:
楼主在“添加剂的选择”中，写到不要使用三乙胺，但是我在一些文献中看到有用三乙胺做添加剂的，这是为什么？

是这样的，不推荐使用三乙胺，因为它进入质谱后永久存在，并能严重抑制离子的电离，降低检测灵敏度。如果试验中一定要用，建议用前咨询一下工程师，看看最高限度能到多少。

原文由 belek 发表:

原文由 dickwang2008 发表:

原文由 belek 发表:
楼主在“添加剂的选择”中，写到不要使用三乙胺，但是我在一些文献中看到有用三乙胺做添加剂的，这是为什么？

是这样的，不推荐使用三乙胺，因为它进入质谱后永久存在，并能严重抑制离子的电离，降低检测灵敏度。如果试验中一定要用，建议用前咨询一下工程师，看看最高限度能到多少。

哦，谢谢！那样添加剂能用难挥发性的钠盐吗？

原文由 belek 发表:

原文由 dickwang2008 发表:

原文由 belek 发表:
楼主在“添加剂的选择”中，写到不要使用三乙胺，但是我在一些文献中看到有用三乙胺做添加剂的，这是为什么？

是这样的，不推荐使用三乙胺，因为它进入质谱后永久存在，并能严重抑制离子的电离，降低检测灵敏度。如果试验中一定要用，建议用前咨询一下工程师，看看最高限度能到多少。

哦，谢谢！那样添加剂能用难挥发性的钠盐吗？

原文由 elevern 发表:
事先声明：我是来挨拍的。

全反式维甲酸中有很长的共轭结构，照理来说紫外吸收应该比较好，采用常规的HPLC血浆极限应该可以至少测到10-50ng/ml，如果不是做人血样的，可能用液质有些浪费。你的质谱图1ug的图(我不知道是血浆样品还是纯标)，离子流很大，峰面积才5000多(没看错吧我)，照这样算下去，LOQ也就2ng。如果你峰上面不喜欢标峰面积，标的是信噪比，我道歉，当我没说。

（waters的MS就是稳定，就算峰面积只有10，也能拿来定量！）

另外，从结构上说，维甲酸应该是用酸沉淀比较好，高氯酸或三氯醋酸，回收率很高。为了避免基质效应，用提取法的话，即使采用酸化再提取，估计回收率也不会太高。不过我没有看到楼主做的方法学，不太好下结论。

另外，关于基质效应的话，我觉得和楼主用的柱子和液相方法有一定的关系。你样品在2min前后出完，这个时候蛋白肯定是没有出完的，常规柱都要差不多3min左右蛋白才能跑净。如果把液相色谱柱和液相条件调整一下的，我觉得会更好一些，采用酸沉淀也能避免基质效应，可能样品的稳定性也会好一些。

内标物的选择，在血样的处理时候必须要考虑两个方面。一个是质谱的响应，也就是楼上各位讲的。我曾经碰到过，进样一个月，样品响应越来越小，内标响应越来越大，全部返工，痛啊。

另外一个，是在血浆样品处理当中，用于抵消处理方法、步骤造成的损失，为什么喜欢用同系物，就是物理性质比较类似、pKa接近，提取回收率比较接近、稳定性接近等等方面。