主题:【求助】85%磷酸在流动相的作用是什么??救急......在线等......

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lizn136
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各位高手:大家好,我做的样品是DPPC(二棕榈酰磷脂酰胆碱),流动相是乙腈:甲醇:85%磷酸=100:6:0.8,这星期进标准品,浓度达到1mg/ml,低浓度也试过,可是跑了35min都没出峰,流速1.5ml/min,检测波长是205nm,硅胶柱,昨天我问了一个工程师,他说磷酸是不出峰的原因,说磷酸在这里达不到调节PH值的作用,让我改用三氟乙酸试一试,还有就是我的标准品是用氯仿甲醇3:2溶解的,我想请教一下各位高手,磷酸在里面到底是什么作用??顺便附上我的一篇参考文献,希望对你们的分析起作用,谢谢了,我在线等......
DPPC[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相检测[/url]
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没做过这样的样品,不过从资料看也不是很理想。首先流动相配比就不是很合理,加磷酸的目的是改善峰形,你可以单走纯乙腈,看什么时候出峰,标准不贵的话在配个甲醇溶解的看看,时间长可用短柱做
lizn136
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呵呵,谢谢,我今天又做了一天,可还是出峰不理想,峰很低,峰面积很小,可能是柱子的问题,我决定换柱.......
lizn136
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原文由 emoc98311 发表:
没做过这样的样品,不过从资料看也不是很理想。首先流动相配比就不是很合理,加磷酸的目的是改善峰形,你可以单走纯乙腈,看什么时候出峰,标准不贵的话在配个甲醇溶解的看看,时间长可用短柱做


标准品挺贵的,折腾不起,呵呵,25mg要1300元,柱子是4.6*250mm的,短柱应该会好点,不过峰太低了,峰型倒是可以,看来没办法了,只能换柱子了......
tanggangfeng
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这里好像有个版友也用85%磷酸做过流动相,你可以搜搜
zealoy1983
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磷酸的作用大致有2个
1 与色谱柱的硅胶键产生竞争性吸附,改善峰形。
2 调节流动相PH值,使它与你的样品的PKa值相近。
xy200609
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流动相是乙腈:甲醇:85%磷酸=100:6:0.8是指定的吗?还是自己摸的条件?

另:你可以扫描一下标准品,确定最大吸收波长?
kong_2002
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1.样品紫外相应值不好
2.该胆碱跟一般柱子键合相负作用太大引起峰扩展及微量强吸附
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