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主题：【求助】求助用反相做蛋白质纯度的资料，请大家帮帮忙

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yuan_log
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发表于：2009/01/15 15:40:31 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
偶目前的工作是利用HPLC测定样品（公司是生产蛋白质疫苗的）中的蛋白质纯度。用反相还是。以前对蛋白质化学不怎么了解，液相也是半路出家（偶是微生物专业的，555～）。实在是很多都搞不懂，求一些这方面的资料，要是有哪位高人也是做这方面工作的，望赐教。（现在工作不好找呀）
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2009/1/15 15:44:39 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
写一下现在遇到的几个大问题，希望大家给与帮助，谢谢了。
1、如何确定样品中的物质（目标物质和杂质，没有目标物质的标准品）都出来了，因为是用面积归一法算纯度的
2、同样的洗脱条件，同一种样品（稳定性考察，保存时间不同）为什么6个月的是三个峰，到了九个月成了一个峰
3、洗脱条件的建立需要怎么进行验证才算是合格的方法呢？

望大家指教
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2009/1/16 11:00:37 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 yuan_log 发表:
写一下现在遇到的几个大问题，希望大家给与帮助，谢谢了。
1、如何确定样品中的物质（目标物质和杂质，没有目标物质的标准品）都出来了，因为是用面积归一法算纯度的
2、同样的洗脱条件，同一种样品（稳定性考察，保存时间不同）为什么6个月的是三个峰，到了九个月成了一个峰
3、洗脱条件的建立需要怎么进行验证才算是合格的方法呢？

望大家指教


1.必须有标准品,否则定性很难,除非已知体系,
2.洗脱条件一样,但是柱子性能有可能改变,另就是样品已经发生改变
3.洗拖条件取决于你的主峰周边有无干扰,另外需要控制杂质是否有干扰,没有标品也是巧妇难为无米之炊
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yuan_log
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2009/1/16 13:47:16 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请走过路过的兄弟姐妹发表一下看法
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