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紫外可见分光光度计（UV）
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主题：【求助】紫外扫描既不出峰还有许多毛刺

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zwyu
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2009/3/28 0:22:05 22楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
高浓度时0.2A的杂散光只是表象，绝不是说它就等于0.2A。切勿把自己绕进去。


原文由 nemoium 发表:

看楼主的图，毛刺有0.2Abs吧，如果这样，就是在低浓度时，谱图该也有毛刺吧？虽然在低浓度时，正常光的强度是大了，但这时0.2Abs的杂散光光也是存在的了。为什么看不到了呢？


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祥子
nemoium
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2009/3/28 0:30:44 23楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 zwyu 发表:
高浓度时0.2A的杂散光只是表象，绝不是说它就等于0.2A。切勿把自己绕进去。


您这么讲，我更进去了。二进宫。



您有当外交官的天赋，嘿嘿。开个玩笑。

谢谢两位，睡觉了。

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Last edit by nemoium
junjun840326
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2009/3/28 16:35:46 24楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 jelly98 发表:
原文由 junjun840326 发表:
图为扫描木糖与DNS反应的吸收峰，不仅没有出现峰值，出现许多小毛刺，到底是为什么啊？哪位大虾能够指点一二？

扫描图


你的样品太浓了，稀释或减小光程。


稀释50倍之后，跑出的曲线除了斜率变小外，毛刺出现位置、大小都基本相同。我真的是没有办法了啊~~
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tutm
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2009/3/28 16:59:06 25楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 junjun840326 发表:
稀释50倍之后，跑出的曲线除了斜率变小外，毛刺出现位置、大小都基本相同。我真的是没有办法了啊~~

别急，可能你还没有经验，没关系的，你这个样品不是很特殊的，应该可以做出来。
最大吸光度值有多少，还在4-5吗？如果还在4-5，还要稀释，建议你稀释250-500倍，尽可能让最大吸收值到1左右。
也可以先取200ml蒸馏水，滴2-3滴你的样品搅匀后先定性地测一下看看。
我们做染料测试，稀释1000倍是常有的事。
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2009/3/28 19:09:33 26楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是啊，要不就尽可能大（比如就来1000倍）的稀释一下。如果毛刺确实小了，那就慢慢减少稀释倍数，看到那里是转折点。
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2009/3/28 19:13:32 27楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 auto1235 发表:
这个问题分析下去要考虑的因数就很多了，不过就低浓度的样品，比方说80%T, 那么有8000个光子通过，那么杂散光因素就可以忽略不计了。


8000个光子对1个光子，想想还挺有道理的。
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sulaisulai
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2009/3/28 19:42:27 28楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
能测这么大的吸光度？
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auto1235
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2009/3/28 22:00:02 29楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
杂散光的可能性有很多种：

1. 仪器外部的光源，如太阳光进入光路。
2. 仪器光源在仪器内壁反射进入到样品或检测器的光,比如常见的镜面腐蚀氧化导致光的散射;
3. 仪器滤光片分光不彻底导致的光的级次干扰;
4. 光栅分光不彻底或老化导致单色性不好;
5. 其它原因
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2009/3/28 22:06:09 30楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 junjun840326 发表:
稀释50倍之后，跑出的曲线除了斜率变小外，毛刺出现位置、大小都基本相同。我真的是没有办法了啊~~


斜率变小证明稀释有效呀,因为图谱上反映的是波长越小吸收越大呀.你只能不停的稀释了.
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zwyu
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2009/3/30 19:51:42 31楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
LZ又做稀释了吗？结果如何？


原文由 tutm 发表:
原文由 junjun840326 发表:
稀释50倍之后，跑出的曲线除了斜率变小外，毛刺出现位置、大小都基本相同。我真的是没有办法了啊~~

别急，可能你还没有经验，没关系的，你这个样品不是很特殊的，应该可以做出来。
最大吸光度值有多少，还在4-5吗？如果还在4-5，还要稀释，建议你稀释250-500倍，尽可能让最大吸收值到1左右。
也可以先取200ml蒸馏水，滴2-3滴你的样品搅匀后先定性地测一下看看。
我们做染料测试，稀释1000倍是常有的事。
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