液相色谱柱的分类:
从填料的不同可以分为以下几种:硅胶基质填料,聚合物填料,其他无机填料
1,硅胶基质填料
a 正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其他具有极性官能团胺基团,如(NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组分的极性大小,即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如正已烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
b 反向色谱 反向色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出,而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反向填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。
2,聚合物填料
聚合物填料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯等,其主要优点是在pH之为1~14均可使用。相对于硅胶基质的C18填料,这类填料具有更强的疏水性,大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。相对于硅胶基质填料,聚合物填料的色谱柱柱效较低。
3,其他无机填料
其他无机填料的色谱柱目前也已经走向商品化。由于这类填料的特殊性质,一般多用于特殊用途。例如:石墨化碳作为反相色谱填料,不需要表面改性,保留能力强,可用于分离某些几何异构体,并可在任何温度和pH值下使用。氧化铝微粒刚性强,可制成稳定的柱床,可在pH=12的流动相中使用。新型氧化锆基质色谱填料,应用范围pH1-14,温度可达100度,目前仍在研究中。