样品前处理
(1)提取
奶粉样品取样5g,准确加入50ml三氯乙酸溶液,加入2ml乙酸铅溶液摇匀,超声提取20min,转入离心管,在10000r/min离心机上离心5min,取上清液。
图4(反相). 空白奶粉。
(2)净化
分别用3ml甲醇,3ml水活化混合型阳离子交换固相萃取柱,取上清液分次上柱,控制过柱速度在1ml/min以内。再用3ml水和3ml甲醇洗涤混合型阳离子交换固相萃取柱,抽近干后用氨水甲醇溶液3ml洗脱。洗脱液50℃氮气吹干,准确加入缓冲液,漩涡振荡1min,0.45um滤膜过滤,上机测定。
表1(反相). 保留时间与峰面积的重现性(方法精密度验证)
色谱分离条件
本实验所用色谱柱为GL Sciences C8 4.6×250mm 5um;检测波长设定为235nm;流速1ml/min;柱温 40℃;进样量为10μl;等度洗脱。
表2(反相). 3个不同浓度样品回收率
流动相配制方法如下:首先配制含10mM柠檬酸和10mM辛烷磺酸钠的缓冲液,调节pH值到3.0。将缓冲液与甲醇按照7:3比例混合,用0.45μm的滤膜过滤后备用。
实验过程与结果
三聚氰胺标准贮备液(1mg/ml):准确称量100.6mg三聚氰胺标准品于100ml容量瓶中,用流动相溶解并准确定容至刻度,并用0.45μm的滤膜过滤,备用。
图5(反相). 空白奶粉加入0.5mg/kg三聚氰胺。
(1)保留时间与峰形
图1为本方法检测三聚氰胺标样的典型色谱图(样品浓度为1μg/ml),由图1可见,本方法所测三聚氰胺保留时间为11.02min,峰形尖锐,对称性好。
(2)标样精密度
取浓度为5μg/ml三聚氰胺标样,连续进样5次,结果如表1所示,由表1结果可见,本方法测定三聚氰胺具有很好的精密度和重现性。5针图谱如图2所示。
(3)线性关系
取标准工作液分别进样,得到校准曲线如图3所示,相关系数为0.9999,线性度良好。
(4)加样回收率
取奶粉空白样品,分别加入适量三聚氰胺标准工作液,使其三聚氰胺终浓度分别为0.5mg/kg,5mg/kg和50mg/kg,另外取阳性样品一个,共一个空白和四个样品。空白称量一份,每个样品各称量两份,总共9份,按照样品前处理方法进行提取纯化。结果如图4、5、6、7所示。