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NY/T 1372-2007饲料中三聚氰胺的测定范围
    本标准规定了测定饲料中三聚氰胺的含量的高效液相色谱法(HPLC)和气相色谱质谱联用法(GC-MS)，其中GC一MS法为确证法。
    本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料、植物性蛋白饲料、宠物饲料(干粮、堪头)中三聚氛胺的测定。
    本标准中EPLC法最低定量限为2. 0 mg/kg, GC一MS法最低定量限为0.05 mg/kg。

2.规范性引用文件
    下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准
    GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
    GB/T 20195动物饲料试样的制备

3 HPLC法
3.1原理
    试样中的三聚氰胺用三抓乙酸溶液提取，提取液离心后经混合型阳离子交换固相萃取柱净化，洗脱物吹干后用甲醇溶液溶解，用高效液相色谱仪进行测定。
3.2试剂与材料
    除非另有规定，仅使用分析纯试剂和符合GB/T 6682的三级水，色谱用水符合GB/T 6682一级水
的规定。
3.2.1甲醇:色谱纯。
3.2.2乙肺:色谱纯。
3.2.3氨水:浓度25%-28%.
3.2.4混合型阳离子交换固相萃取柱:60 mg, 3 mL
3.2.5三抓乙酸溶液10 g/L:称取log三抓乙酸加水至1000 mL
3.2.6氨水甲醇溶液:量取5 mL氨水，溶解于100 mL甲醇中。
3.2.7乙酸铅溶液22 g/L:取22 g乙酸铅用约300 rnL水落解后定容至1 L
3.2.8滤膜:0.45 pm，有机相。
3.2.9甲醉溶液:200 mL甲醇(3.2.1)加人800 mL一级水，混匀。
3.2.10流动相:称取2.02g庚烷磺酸钠和2.10g柠檬酸于1L容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。取
该溶液900 mL加入100 ML乙腈(3.2.2)
3.2.11三聚氰胺标准品(纯度>9996)。
3.2.12三聚仅胺标准溶液
3.2.12.1标准储备液:称取100 mg(精确到0.1 mg)的三聚氰胺标准品，用甲醇溶液((3.2.9)溶解并定
容于100 ML容量瓶中，该溶液浓度为1 mg/rnL，于4℃冰箱内贮存，有效期3个月。
NY/T1372-2007
  3.2.12.2标准中间液:吸取标准储备液5.00 mL, V 50 mL容量瓶内，用甲醇溶液(3.2.9)定容至50
  ML，该溶液三聚氰胺浓度为100 icg/mL，于4℃冰箱内贮存，有效期1个月。
，3.2.12.3标准工作液:用移液管分别移取标准中间液1 mL,5 mL,10 mL,25 mL,50 mL于5个100 MIL
  容量瓶内，用甲醇溶液(3.2.9)定容，该溶液三聚氰胺浓度为1.0 tLg/mL,5.0 tLg/mL,10 icg/mL,
  25 feg/mL,50 pg/mL。于4℃冰箱内贮存，有效期1周。
  3.3仪翻与设备
  3.3.1高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测器或紫外检测器。
  3.3.2离心机:10 000 r/nuns
  3.3.3旋混合器。
  3.3.4超声波清洗器。
  3.3.5氮吹仪，可控温至60r-。
  3.3.6固相萃取装置。
  3.3.7高速匀质器。
  3.3.8索式提取器。
  3.3.9展荡摇床。一
  3.4试样制备
      按照(3,B/T 20195的规定制备试样。
  3.5测定步扮
    3.5.1提取
  3.5.1.1配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料、植物性蛋白饲料和宠物饲料(干粮)中三聚氰胺的提取。称取5g试样(精确至0.01 g)，准确加人50 mL三氯乙酸溶液(3.2.5)，加人2 mL乙酸铅溶液
  (3.2.7)。摇匀，超声提取20 min。静止2 rain，取上层提取液约30 mL转人离心管，在10 000 r/min离心机上离心5 min.
  3.5.1.2宠物饲料(雄头)中三聚氰胺的提取。称取5g试样(精确至0.01 g)，加人50 mL乙醚，摇床上
  120 r/min振荡1h，弃去乙醚，再加人50 ML乙醚，摇床上120 r/min振荡1h，弃去乙醚，其余步骤同
    3.5.1.to
    3.5.2净化
      分别用3 mL甲醇，3 mL水活化混合型阳离子交换固相萃取柱，准确移取10 ML离心液分次上柱，控制过柱速度在1 mL/min以内。再用3 mL水和3 mL甲醇洗涤混合型阳离子交换固相萃取柱，抽近干后用氨水甲醉溶液(3.2.6)3 mL洗脱。洗脱液50℃氮气吹干，准确加人甲醇溶液(3.2.9),涡旋振荡
  1 min，过0.45 pm滤膜，上机测定。
    3.5.3液相色谱条件
      色谱柱:C8柱，柱长150~，内径4.6~，粒度5 ptn;或性能相当的色谱柱。
      柱温:室温。
      流动相流速:1.0 mL/mino
      检测波长:240 nmo
    3.5.4浏定
      按照保留时间进行定性，试样与标准品保留时间的相对偏差不大于2%，单点或多点校正外标法定 量。待测样液中三聚氰胺的响应值应在工作曲线范围内。
    3.6结果计算和表述
  3.6.1试样中三聚氛胺的含量x，以质量分数毫克每千克(mg/掩)表示，单点校正按式(1)计算:
   
                                X=(A*Cs*V/AS*M)*N
式中:
V—净化后加人的甲醇溶液体积，单位为毫升(ML);
As—三聚氰胺标准溶液对应的色谱峰面积响应值;
A—试样溶液对应的色谱峰面积响应值;
Cs—三聚氰胺标准溶液的浓度，单位为微克每毫升(pg/mL);
m—试样质量，单位为克(g);
n—稀释倍数。
多点校正按式(2)计算:
                        X一C-x卫x。......……。..…，.....................··……(2)
    式中:
    V—净化后加入的甲醇溶液体积，单位为毫升(ML);
    Cz—标准曲线上查得的试样中三聚氰胺的浓度，单位为微克每毫升(pg/mL) ;
    m—试样质量，单位为克(g);
    ”—稀释倍数。
3.6.2结果衰示
    平行测定结果用算术平均值表示，结果保留三位有效数字。
3.7重复性
    在同一实验室由同一操作人员使用同一仪器完成的两个平行测定的相对偏差不大于10%.

4 GC-MS法
4.1方法原理
    试样中的三聚氰胺用三氯乙酸溶液提取，经混合型阳离子交换固相萃取柱净化，用N, o-双三甲基-硅基三氟乙酞胺(BSTFA)衍生化，以气相色谱质谱联用仪进行定性和定量。
4.2试荆和材料
4.2.1衍生化试剂:BSTFA+ 1%三甲基氯硅烷(TMCS) o
4.2.2毗咤:优级纯。
4.2.3其他试剂和材料同3.2.1一3.2.8,3.2.11,3.2.120
4.2.4标准工作液:用移液管分别吸取标准工作液(3.2.12.3)中浓度为10 lAg /mL的溶液0.5 mL,l
mL,2 mL,5 mL,10 mL于5个100 ML容量瓶内，用甲醇定容，该溶液三聚氰胺浓度为0.05 feg/mL,0.1
Fcg/mL,O. 2 pg/mL,O. 5 Fcg/mL,1.0 jcg/mLo
4.3仪器和设备
4.3.1气相色谱质谱联用仪。
4.3.2其他同3.3.2---3.3.90
4 .4分析步骤
4.4.1前处理同3.5.1-3.5.2，但需根据洗脱液中三聚氰胺的浓度用甲醇进行适当稀释。
4.4.2衍生化
    取4.4.1的稀释液适量用氮气吹干，加人200汕的毗咤和200汕的衍生化试剂(4.2.1),混匀，
70℃反应30 min。同时，用三聚氰胺标准系列(4.2.4)或相应浓度单点标准做同步衍生。
4.4.3测定
NY/T1372-2007
4.4.3.】CC一MS条件
    色谱柱:柱长30 m，内径0.25 mm，甲基苯基聚硅氧烷涂层，膜厚0.25 pxn.
    载气:氮气，流速为1.3 mL/min.
    进样量:1沙.
    进样口温度:2501v
    升温程序:起始温度75`C，持续1.0 min，以301C /min升温至3001，保持2.0 min.
    传翰线温度:280r-。
    运行时间:10. 5 min.
    扫描范围:60 m/z-400 m/z.
    扫描模式:选择离子扫描。监测离子99 m/z,171 m/z,327 m/z,342 m/z.
    离子源温度:230r。
    EI源轰击能:70 eV.
4.4.3:2测定
    定性方法:试样与标准品保留时间的相对偏差不大于0.5%，特征离子丰度与标准品相差不大于
20%。
    定量方法:以342,327,171和99峰面积之和进行单点或多点校正定量。
4.5结果计算和裹述
4.5.1试样中三聚佩胺的含量X，以质量分数毫克每千克(mg/kg)表示，单点校正按式((3)计算:
                                                  Ax〔污xV、，，，、
                                          X="于`"止二 x n·······································……(3)
                                                      A‘xm一’“一尹
式中:
A—试样溶液对应的色谱峰面积响应值;
As—三聚氛胺标准溶液对应的色谱峰面积响应值;
cs—标准工作液中三聚氰胺的浓度，单位为微克每毫升(E,Ag/mL) ;
V—用于衍生的试样溶液(4.4.2)体积，单位为毫升(ML);
m—试样质量，单位为克(g);
n—稀释倍数。
多点校准时，可用公式(4):
Cz XV
    ”落
Xn·······································。··……(4)
    式中:
    V—用于衍生的试样溶液(4.4.2)体积，单位为毫升(ML);
  Cx—由标准曲线而得的样液中三聚氰胺的含量，单位为微克每毫升(fig/ML);
    m—试样量，单位为克(g);
    n—稀释倍数。
4.5.2平行测定结果用算术平均值表示，结果保留三位有效数字。
4.6皿复性
    在同一实验室由同一操作人员使用同一仪器完成的两个平行测定的相对偏差不大于20%.

样品基质干扰或柱残留物？仅一次进样，重复进样有吗？

原文由 jimzhu 发表:
样品基质干扰或柱残留物？仅一次进样，重复进样有吗？

6次重复进样都是这样，不知为什么

原文由 ynsfeed 发表:

原文由 jimzhu 发表:
样品基质干扰或柱残留物？仅一次进样，重复进样有吗？

6次重复进样都是这样，不知为什么

老化柱子和更换进样衬管试试？

我做其它项目时，仪器的出峰是正常的