主题：【求助】HPLC中的细节问题

原文由 zlzlp2009 发表:
针对HPLC中的一些细节问题,我想请问下各位大侠,以可以让我后来的工作进展更顺利!
1、梯度进样时，建议是：每次梯度洗脱之后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复到初始的状态。需让10~30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相和初始流动相达到完全平衡！
请问下这段话的意思是让我每进一针样就冲半个小时,还是每天开始做实验时冲洗半小时就行拉?
2、手动进样器进样时，怎么才能不留气泡？
3、真空过滤泵过后为什么不需要过滤？
4、超声波的效果如何怎么判断，为什么有的时候超了30min瓶子发热，有的时候就不会？
5、针对缓冲液的配置，有没有计算公式，我每次都要网上找配方？我想问下这些配方他们是从哪里得来的？
6、要是配PH=3.0的乙酸溶液，我这有纯冰乙酸，水和乙酸的比例如何？怎么得来的。
7、算标准曲线的时候，用EXCEL作图时出来了这个曲线：y = 2E+07x + 18012
请问下其中的E 是指什么？+07又是指什么呢？
感觉这段时间做实验学到很多东西，但也有许多东西不知道。忘各位大侠帮忙解答！
在此感谢各位对“太阳丛西边出来拉”这篇稿子，我也在积极的实验中！有什么注意的细节问题也帮忙提下！

原文由 pandora98 发表:
1.梯度进样时，每针样品采完以后最好都在梯度最后用初始比例的流动相平衡几分钟，一般150x4.6mm的柱子我们平衡5--7分钟就可以。
2.手动进样器里有气泡，吸样品时多吸一些，针头朝上，然后轻轻的弹几下进样器靠近针头的位置，气泡就上升到出口位置了，进样前先把气泡排掉就可以了。
3.不明白什么意思
4.超声一方面能把溶解到空气中的气体赶出来，另一方面超声又能促进物质的溶解，当然也包括气体的溶解，所以超声时间不宜过长，一般15分钟比较合适，超声一般只能去除30%左右的气体，而且流动相置放三四个小时以后气体就又溶解回去了，所以超声的时候瓶盖不要拧紧，超完以后不用时要拧紧，放置四五个小时以后最好重新超声。发热是因为超声波仪器能量导致，一般的超声清洗仪器有两个功率最强的位置，流动相放到这两个位置时超声效果才好，而且流动相的瓶子浸没到超声清洗仪内液面以下的部分才会有效果，所以尽量的让超声清洗仪内液位在一半以上，2/3比较合适。
5.各种缓冲溶液的配置都有表格可查，论坛内就发过很多，一般化验员手册上也都有
6.这个需要知道冰乙酸的浓度才好调

原文由 zlzlp2009 发表:

原文由 pandora98 发表:
1.梯度进样时，每针样品采完以后最好都在梯度最后用初始比例的流动相平衡几分钟，一般150x4.6mm的柱子我们平衡5--7分钟就可以。
2.手动进样器里有气泡，吸样品时多吸一些，针头朝上，然后轻轻的弹几下进样器靠近针头的位置，气泡就上升到出口位置了，进样前先把气泡排掉就可以了。
3.不明白什么意思
4.超声一方面能把溶解到空气中的气体赶出来，另一方面超声又能促进物质的溶解，当然也包括气体的溶解，所以超声时间不宜过长，一般15分钟比较合适，超声一般只能去除30%左右的气体，而且流动相置放三四个小时以后气体就又溶解回去了，所以超声的时候瓶盖不要拧紧，超完以后不用时要拧紧，放置四五个小时以后最好重新超声。发热是因为超声波仪器能量导致，一般的超声清洗仪器有两个功率最强的位置，流动相放到这两个位置时超声效果才好，而且流动相的瓶子浸没到超声清洗仪内液面以下的部分才会有效果，所以尽量的让超声清洗仪内液位在一半以上，2/3比较合适。
5.各种缓冲溶液的配置都有表格可查，论坛内就发过很多，一般化验员手册上也都有
6.这个需要知道冰乙酸的浓度才好调

非常感谢你的回答。对于你的答案我补充下：
2、对于2我怎么感觉我一把微量进样器针头朝上，那气泡就下来拉！弹不掉！
3、不是流动相过滤的时候要经过真空过滤泵吗，那下面的锥形瓶（乘装滤液）要洗不？我们一直不洗，我想问问那么多试剂混合不会产生污染吗？要清洗的话有什么清洗呢？
4、那个有时发热有时不发热的原因是什么呢？是不是由于超声波的工作效率呢？
5、我也知道啊，就是想问下。他们是怎么算出来的？有没有专门的公式？象醋酸缓冲液的PH=PKa+Lg([Ac-]/[HAc])
6、冰乙酸C=17MOL/L，请帮忙算算，看能不能告诉下具体的算法，本人百思不得其解！