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液相色谱（LC）
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主题：【求助】请高手解答：如何改变条件使峰分开

浏览0 回复14 电梯直达
acesben
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发表于：2009/09/20 09:12:53 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
本人 最近做一种色素的分离
昨天刚刚做了 液相
如图 1甲醇：水=60：40 流速1ml/min
2 甲醇：水=50:50 流速 0.5ml/min

很明显  峰移开一部分
但是 不明显
我想 请诸位 帮我出出注意
1 是 继续改变 比例 还是  改变 流速  还是 加其他 溶剂
（本人 加过一次  乙腈  大概 水：甲醇：乙腈=60：30：10  效果比这个 好不到哪去 就是 又分出 几个小峰、）

亦或者  加些缓冲液？？

2  本人 用的是 氯仿：甲醇来 分离样品的 
经旋转蒸干后 用微量水 溶解进样的、
我想请问 大家 那两个最高的峰 会不会是 溶剂峰呢？

我有点迷惑 感觉不像  但有 不敢确定。
非常感谢 大家！


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2009/9/20 9:14:36 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
图三是  甲醇：水=55：45
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wintersnowg
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2009/9/20 11:30:53 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用的什么柱子啊 多长的柱子  水相多点试试啊  用长柱子 会不会好点呢
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有水有渝
xky0230699
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2009/9/20 19:26:13 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
根据色素的性，改变一下PH，或用缓冲盐试试。
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acesben
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2009/9/20 21:20:11 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
柱子 就一个 好像30cm的吧  反正柱子是不能换了
其他的 我发现 增加水的比例 洗的峰  更多了。。
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acesben
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2009/9/20 21:20:45 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请 解释一下 ph与 缓冲盐的关系 谢谢
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zjw1985
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2009/9/21 15:51:55 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
流速加大没试试吗？
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acesben
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2009/9/21 16:34:55 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
流速大了 更分不开啊
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liu198315
liu198315
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2009/9/21 19:46:08 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
流速关系不大
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〓猪哥哥〓
03yx2
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2009/9/21 21:52:44 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一个是调节PH， 一个是更换柱子的类型试试看。
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looye2006
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2009/9/21 22:08:44 11楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1、你的色素 是有机还是无机物，用氯仿提取，又用水溶解？！！！想想清楚原理。
2、前面是不是溶剂峰，你做一针空白不就知道了？！
3、通常C18，反相色谱的话，溶剂峰处有倒峰的，水负峰。
4、有DAD的话，你看一下光谱图。
5、看一下你的两个峰，峰谷比，你很难分开，走一下梯度洗脱。参考：
梯度条件
流动相
时间（min）
A％ B％
曲线
0 25 75 线性
10.0 25 75 线性
25.0 0 100 线性
32.0 0 100 线性
35.0 25 75 线性
40.0 25 75 线性
6、加一下酸或缓冲盐。0.1%甲酸，三乙胺，0.1%磷酸等。
首先建议，你搞清色素的性质，然后找一种类似的分析物的分析方法，再优化条件。
该帖子作者被版主 03yx2加 10积分， 2经验，加分理由：详细解答，鼓励！
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