主题：【资料】兴奋剂类分析方法系列讲座(40讲 待续)

兴奋剂类分析方法系列讲座（37）GC - MS 法测定尿中麻醉药γ- 羟基丁酸
 
GC - MS 法测定尿中麻醉药γ- 羟基丁酸

摘 要

γ- 羟基丁酸（GHB）是娱乐场所滥用的麻醉药。本文用气相色谱- 质谱法（GC - MS）测定尿中GHB。尿样酸化后于80℃经20min GHB 转化为丁内酯（GBL），用二氯甲烷提取，气相色谱-质谱-选择离子检测模式测定，正己酸为内标。检测离子GBL 为m/ z 86、56、42、28，内标为m/ z 87、73、60、41，定量离分别为m/ z 86 和87。方法检出限0.08μg / mL（S / N = 3）。尿中加标10μg / mL，6 次测定的相对标准偏差为2. 5%，回收率57. 7%。线性范围0 ～ 50μg / mL，相关系数（r2）为0.9996。用该方法分析20 个尿样，GHB 浓度都低于1μg / mL。该方法灵敏度高，简单可靠，适用于法医和临床检验。



本文由张绍雨1 林云珠2 柯洪伟2 彭亦如2 黄增萍3（1. 福建公安高等专科学校；2. 福建师范大学化学与材料学院；3. 福建省公安厅刑警总队）等研究人员共同完成。第一作者当时为副教授、博士，主要从事法医毒理学和毒物分析的教学、研究和鉴定工作。



1 前 言

γ- 羟基丁酸（GHB）是哺乳动物和人体内γ-氨基丁酸的代谢物，也是一种麻醉药。GHB 具有欣快、镇静作用，上世纪90 年代起开始在娱乐场所滥用并迅速流行。美国于2000 年将GHB 列入I 类（Schedule I）毒品管制［1］。GHB 一般经口服进入体内，在体内部分转化为内酯，部分在GHB 脱氢酶（GHB dehydrogenase）作用下转化为琥珀醛酸进入Krebs 循环，最终转化为二氧化碳和水。口服GHB约有5%以原形从尿中排出。分析尿中GHB 的方法主要是气相色谱法（GC）［2］和色质联用（GC -MS）［3 - 5］。

GHB 分析结果的解释有一定困难，因为GHB 在人体内吸收和代谢快（口服半衰期30 ～ 60min），而且正常人尿液中也能检测到痕量GHB，尿在体外放置过程中也会产生GHB（随温度、时间和有无防腐剂而异）。但是尿中GHB 浓度仍然是确定是否滥用的重要依据。

据笔者所知，我国尚无相关案例报道，GHB 毒理学和分析方法报道甚少，但由于GHB 合成简单，成本低廉，容易蔓延，因此研究它的分析方法很有必要。本文用GC - MS 法测定尿中GHB，改善了灵敏度，方法可靠、简单实用。



2 实 验

2.1 仪器

6890 气相色谱仪，5973N 质谱检测器，7683 自动进样器（带100 位进样盘）（Agilent Technologies）。

2.2 试剂

γ- 羟基丁酸钠，98%（批号：FA000164，LanｃａｓｔerSynthesis）；γ- 丁内酯（GBL），97%；正己酸（IS），98%（上海化学试剂公司）；其它试剂和溶剂均为分析纯。1mg / mL GHB、983μg / mL GBL 和1mg / mL IS 标准储备液分别由适量γ- 羟基丁酸钠、丁内脂和正

己酸溶于甲醇配制。工作溶液由标准储备液用水稀释10 倍配制。

2.3 材料

空白尿样1 例，健康未接触GHB 者尿样20 例。采样后加入约1%氟化钠，4℃保存，于24h 内分析。

2.4 样品处理

1mL 尿样加入100μg / mL 正己酸工作标准100μL、6mol / L 硫酸0.5mL，用水调节至2. 5mL，再加入3. 0g 无水硫酸钠，混旋30s 后密封，于80℃水浴中放置20min。冷却后加入0. 5mL 二氯甲烷，混旋约30s，静置后将有机层转移到进样小瓶中。

2.5 色谱条件和质谱条件

色谱柱为HP - FFAP，25m × 0. 20mm id，膜厚0.33μm（ J&W Scientific）；炉温从100℃（2min）以20℃ /min 速度上升到230℃（2min）；进样口和色谱- 质谱接口温度皆为240℃；载气（氦气，99.999%）流速为1.2mL / min，分流比50:1；进样量1μL。离子源EI 70eV；离子源和四极杆温度分别为230℃和150℃；质量扫描范围m/ z 25 ～ 500，选择离子检测（SIM），检测离子，GBL 为m/ z 86、56、42、28；IS 为m/ z 87、73、60、41；定量离子，GBL 为m/ z 86；IS为m/ z 87，溶剂延迟3min，质谱库NIST98。



3 结果与与讨论

3.1 色谱分离

加标样品总离子图（TIC）见图1。GBL 和IS 质谱图与NIST98 质谱库检索结果一致。采用HP -FFAP 极性柱，GBL 和IS 色谱行为良好。色谱分析时间为10.50min，GBL 和IS 保留时间（tR）分别为5.26min 和6.36min。总离子图上tR 6. 40min 附近有一杂质峰，但和IS 基线分离，并且在m/ z 86、87 提取离子图上消失，对分析没有干扰。




3.2 条件优化

3.2.1 酸浓度

GHB 的内酯化反应见图示2。用盐酸调节尿样酸度，总离子色谱图上6.5min后基线抬高，检出HCl +（m/ z 36）离子。使用硫酸后基线平稳。0.1 ～ 0.5 mL 6mol / L 硫酸酸化尿样对分析影响不大。最后用0.5mL 6mol / L 硫酸溶液酸化尿样。



3.2.2 内酯化温度和时间

酸化后的尿样在80℃下水浴加热5 ～ 60min，相对峰面积变化不大。加热20min，相对峰面积为60min 时的91%（图3），故内酯化采用80℃ / 20min。



3.2.3 溶剂选择

氯仿、二氯甲烷以及氯仿: 异丙醇9:1（v / v）混合溶剂萃取率较高，以二氯甲烷最佳，乙酸乙酯、乙醚较差（图4）。最后采用二氯甲烷为萃取溶剂。



3.2.4 盐效应

用无水硫酸钠调节溶液离子强度。随着硫酸钠增加，GBL 峰面积和相对峰面积都增加。当尿中加入1.5 ～ 3g 盐，GBL 和IS 峰面积及相对峰面积变化缓慢，超过3g 重现性变差。和不加盐相比，加3. 0g无水硫酸钠，GBL 峰面积增加了2. 8 倍。最后确定1mL 尿样中加入3. 0g 无水硫酸钠。水浴加热前后加入无水硫酸钠相对峰面积无显著差别，但前者得到的萃取液杂质少，故在水浴加热前加入硫酸钠。

3.3 分析性能

用1μg / mL 加标尿样GHB m/ z 86 的信噪比（S / N）计算检出限（S / N = 3）为0.08μg / mL，优于文献值［4］。检出限的改善得益于用硫酸钠调节离子强度、合适的萃取溶剂和选择离子检测。6 次测定10μg /mL 加标尿样的相对标准偏差为2.5%。含0、1、3、5、10、30、50μg / mL GHB 加标样品，相对峰面积与GHB 浓度成线性关系，线性回归方程为y =0.0575x + 0.0119（y 为相对峰面积，x 为GHB 浓度），相关系数（r2）为0.9996。

1mL 尿样中加入100μg / mL GHB 工作标准100μL，不加内标，用上述方法分析。相当量的GBL直接加入到二氯甲烷中定容至0.5mL 分析。比较两种情况下GBL 的色谱峰面积，得到的回收率为57.7%，和文献结果接近［6］。尽管回收率略低，但是方法灵敏度较高，重现性好，能够满足临床和法医毒物分析需要。

3.4 样品分析

以5μg / mL GHB 加标样品校正，用本法分析未接触GHB 的20 个自愿者的尿样，结果见表1。



n. d.：未检出



考虑到正常人尿液中GHB 的浓度较低，为了使内标和GBL 峰面积不致相差太大，IS 工作溶液浓度稀释到20μg / mL 再加标。志愿者中男性12 例，女性8 例。除1 例外（编号11），其余年龄在18 ～ 23 岁之间。检测结果，16 例呈阳性，占80%。尿样中GHB浓度都低于1μg / mL，平均值为0. 32μg / mL，标准差为0.28μg / mL，所有结果不超过阈值（正常人尿中GHB 阈值为10μg / mL）［7 ～ 9］。



4 结 论

在酸性条件下将尿中GHB 内脂化，转化为GBL，用溶剂萃取后，用GC - MS - SIM 进行检测，是分析尿中GHB 可靠便利的方法，特别适用于法医和临床检验。样品中加入无水硫酸钠改善了检出限；二氯甲烷作萃取溶剂杂质少，提取率高；正己酸作为内标，不用氘代内标，降低了实验成本。该方法无须硅烷化衍生，减少了衍生化试剂对色谱系统的污染。

兴奋剂类分析方法系列讲座（38）固相萃取同时提取尿中的39种药毒物 

 
固相萃取同时提取尿中的39种药毒物



摘 要

目的:：建立固相萃取方法同时提取尿中的39种药毒物并用高效液相色谱法进行分析。

方法：以多沙普仑为内标, 1mL尿样经小柱固相萃取, 用HPLC进行分析。

结果：39种药毒物可同时从尿中提出, 内源性物质不干扰测定。其绝对回收率除吗啡外均大于70%；天内及天间精密度均小于10%；检测限1~15ng/mL；线性相关系数在0.9977以上。

结论：本法快速、简便、重现性好, 空白干扰小, 可用于实际案例的药物毒物筛选。



本文由张玉荣1, 梁晨1, 金琦芸2, 郭幼梅2, 张润生1, , 王跨陡1, , 王威1, , 严松茂1

（1、上海市刑事科学技术研究所, 2、上海刃复旦大学药学院药物分析教研室,）共同协作完成。第一作者张玉荣为上海市刑事科学技术研究所副所长，主要从事体内、外药毒物的分离检测和研究的高级工程师。



前 言

固相萃取作为从生物样品中提取净化微量药物或其代谢物的方法, 已被广泛地应用于生物样品的检测中, 其中尤以与HPLC技术结合用于生物样品的分析引人注目〔1~4〕。目前已报道的固相萃取文献大多只涉及到几种或某一类药毒物的分析〔2~4〕, 本文希望通过扩大药物的覆盖面, 建立一种可快速、同时测定多种药毒物的切实可行的并具有通用性的方法, 用同一种前处理方法同时提取尿中的多种药毒物, 以满足实际检案的需要。



实 验

1  材料和方法

1.1  仪器

HP1100系列高效液相色谱仪（配置G1315光电二极管阵列检测器）。

1.2  对照标准品和试剂

对照品及内标多沙普仑均由中国药品生物制品检定所提供, 39种对照品名称详见表1；取三乙胺100mL加水1200mL混合, 用冰醋酸调节pH8.0, 最后加水至1500mL, 配制成三乙胺缓冲液；固相萃取小柱（HLB 1mL/30g）购自Waters公司。

1.3  方法

1.3.1  样品处理

依次用甲醇、水各1mL通过固相萃取小柱, 吸取1mL尿样上样后依次用1mL 2%氨水5%甲醇的水、1mL5%甲醇的水清洗, 将固相萃取小柱离心甩干（3000r/min ,3min）, 最后用1mL二氯甲烷洗脱。洗脱液加人内标储备液3μL在50℃水浴中空气流下吹干, 残渣用50μL甲醇溶解, 取10μL进样。

1.3.2  色谱条件

采用Lichrospher 100 RP-18e（250mm×4mm×5μm）色谱柱；二极管阵列检测器,检测波长为230nm、250nm, 同时进行紫外扫描；柱温50℃ ；流动相A  甲醇：水：三乙胺缓冲液= 50:46:4 , 流速0.8mL/min；而流动相B 甲醇：水：三乙胺缓冲液 = 75:16:9, 流速0.6mL/min。

2  结果

2.1  色谱分离

在选定的HPLC条件下, 药物色谱峰都得到了良好的分离, 流动相A、B下各药毒物的保留时间范围分别为4.99~36.3min和5.43~28.28min。空白尿样经提取后在两个色谱条件下不干扰测定。

2.2  线性关系

以药物峰面积与内标峰面积之比（Y）对样品中药物浓度（X）作图（略）, 得39种药毒物的回归方程和相关系数, 各种药物的线性良好, 相关系数在0.9977以上.。

2.3        精密度和回收率

分别加药毒物储备液配成高、中、低三个浓度的尿样, 按1.3.1项样品处理方法操作。每个浓度一天同一次操作中分析5份, 得天内精密度；不同天内各分析1份, 分析5天, 得天间精密度。同时将相应理论浓度的标准溶液进样10μL, 对应的色谱峰与内标峰面积比之比为绝对回收率, 见表1。






下列资料由“仪器信息网”负责搜集整理，版权所有。请勿复制粘贴，否则视为侵权
文章类别：
阅读次数：17
文章日期：2009-9-13 12:15:39
 
固相萃取同时提取尿中的39种药毒物



摘 要

目的:：建立固相萃取方法同时提取尿中的39种药毒物并用高效液相色谱法进行分析。

方法：以多沙普仑为内标, 1mL尿样经小柱固相萃取, 用HPLC进行分析。

结果：39种药毒物可同时从尿中提出, 内源性物质不干扰测定。其绝对回收率除吗啡外均大于70%；天内及天间精密度均小于10%；检测限1~15ng/mL；线性相关系数在0.9977以上。

结论：本法快速、简便、重现性好, 空白干扰小, 可用于实际案例的药物毒物筛选。



本文由张玉荣1, 梁晨1, 金琦芸2, 郭幼梅2, 张润生1, , 王跨陡1, , 王威1, , 严松茂1

（1、上海市刑事科学技术研究所, 2、上海刃复旦大学药学院药物分析教研室,）共同协作完成。第一作者张玉荣为上海市刑事科学技术研究所副所长，主要从事体内、外药毒物的分离检测和研究的高级工程师。



前 言

固相萃取作为从生物样品中提取净化微量药物或其代谢物的方法, 已被广泛地应用于生物样品的检测中, 其中尤以与HPLC技术结合用于生物样品的分析引人注目〔1~4〕。目前已报道的固相萃取文献大多只涉及到几种或某一类药毒物的分析〔2~4〕, 本文希望通过扩大药物的覆盖面, 建立一种可快速、同时测定多种药毒物的切实可行的并具有通用性的方法, 用同一种前处理方法同时提取尿中的多种药毒物, 以满足实际检案的需要。



实 验

1  材料和方法

1.1  仪器

HP1100系列高效液相色谱仪（配置G1315光电二极管阵列检测器）。

1.2  对照标准品和试剂

对照品及内标多沙普仑均由中国药品生物制品检定所提供, 39种对照品名称详见表1；取三乙胺100mL加水1200mL混合, 用冰醋酸调节pH8.0, 最后加水至1500mL, 配制成三乙胺缓冲液；固相萃取小柱（HLB 1mL/30g）购自Waters公司。

1.3  方法

1.3.1  样品处理

依次用甲醇、水各1mL通过固相萃取小柱, 吸取1mL尿样上样后依次用1mL 2%氨水5%甲醇的水、1mL5%甲醇的水清洗, 将固相萃取小柱离心甩干（3000r/min ,3min）, 最后用1mL二氯甲烷洗脱。洗脱液加人内标储备液3μL在50℃水浴中空气流下吹干, 残渣用50μL甲醇溶解, 取10μL进样。

1.3.2  色谱条件

采用Lichrospher 100 RP-18e（250mm×4mm×5μm）色谱柱；二极管阵列检测器,检测波长为230nm、250nm, 同时进行紫外扫描；柱温50℃ ；流动相A  甲醇：水：三乙胺缓冲液= 50:46:4 , 流速0.8mL/min；而流动相B 甲醇：水：三乙胺缓冲液 = 75:16:9, 流速0.6mL/min。

兴奋剂类分析方法系列讲座（38）（下）固相萃取同时提取尿中的39种药毒物

2  结果

2.1  色谱分离

在选定的HPLC条件下, 药物色谱峰都得到了良好的分离, 流动相A、B下各药毒物的保留时间范围分别为4.99~36.3min和5.43~28.28min。空白尿样经提取后在两个色谱条件下不干扰测定。

2.2  线性关系

以药物峰面积与内标峰面积之比（Y）对样品中药物浓度（X）作图（略）, 得39种药毒物的回归方程和相关系数, 各种药物的线性良好, 相关系数在0.9977以上.。

2.3        精密度和回收率

分别加药毒物储备液配成高、中、低三个浓度的尿样, 按1.3.1项样品处理方法操作。每个浓度一天同一次操作中分析5份, 得天内精密度；不同天内各分析1份, 分析5天, 得天间精密度。同时将相应理论浓度的标准溶液进样10μL, 对应的色谱峰与内标峰面积比之比为绝对回收率, 见表1。








2.4  检测限

      取不同量的各组药毒物，挥干溶剂甲醇，加尿1mL，按样品处理方法操作。在信噪比为3 时：哌唑嗪、氟西泮、马钱子碱、奋乃静、异丙嗪、氯丙嗪、氯普噻吨、三氟拉嗪、罂粟碱、蒂巴因、氯氮平、那可汀、丙咪嗪、阿米替林、泰尔登的检测限为1ng/mL；氟硝西泮、艾司唑仑、阿普唑仑、苯海拉明、布比卡因的检测限为3ng/mL；普鲁卡因、三唑仑、克仑特罗、替马西泮、地西泮、美沙酮、氟奋乃静的检测限为5ng/mL；苯妥因钠、导眠能、戊巴比妥、吗啡、O6 –单乙酰吗啡、福尔可定的检测限为15ng/mL

3            讨论

流动相的选择：由于药物涉及面广，种类多，在HPLC中的色谱行为有很大差异，很难用同一色谱条件进行分析，故采用两个分析流动相A和B来分析。为了便于定性和定量又分别 将A组和B组中的药毒物分成两组，A1和A2组药毒物用流动相A分析，B1和B2组药毒物用流动相B分析。

尿样用磷酸盐缓冲液调节pH后上样，结果加入pH = 6和pH = 8 的磷酸盐缓冲液后空白的杂质增多，加入pH = 7的磷酸盐缓冲液后与不加缓冲液差别不大，因此选择将尿样直接上样。用不同的溶剂作为清洗液，观察药毒物与尿中杂质的保留情况，最后选择依次用1mL2%氨水 5%甲醇水、1mL 5%甲醇水清洗，既能较好的去除杂质，又能较好的保留药毒物。

固相萃取中的洗脱液采用多种单一和混合溶剂，发现甲醇、丙酮、异丙醇、乙酸乙酯、甲醇/二氯甲烷，异丙醇/二氯甲烷作为洗脱液药毒物能得到很高的回收率，但也洗出了大量杂质；乙醚、正巳烷、苯不同配比的正巳烷/二氯甲烷作为洗脱液，空白无干扰，但有些药毒物的回收率很低；二氯甲烷既可使药毒物保证较高的回收率，洗出的杂质又较少，因此选其作洗脱液。

本方法应用于一例自杀案的分析，快速从尿中检出多虑平成分，为抢救过程提供了可靠依据。

兴奋剂类分析方法系列讲座（39）LC-MS 法同时测定大鼠血浆中

LC-MS 法同时测定大鼠血浆中

咪达唑仑、右美沙芬及奥美拉唑的浓度





摘 要

目的：LC-MS 法同时测定大鼠血浆中咪达唑仑、右美沙芬及奥美拉唑浓度，并用于药代动力学高通量筛选中“鸡尾酒法”的研究中。

方法：色谱柱为Shim-pack ODS（250 mm × 2.0 mm ID，5.0μm）；流动相为0.01%醋酸铵-甲醇（30 : 70）。检测仪为岛津LC-MS-2010 四极杆质谱检测器，电喷雾离子化（ESI），内标为地西泮。检测离子：咪达唑仑为［M + H］+  m / z：326.0，右美沙芬为［M + H］+  m / z：272.1，奥美拉唑为［M + H］+  m / z：346.0，地西泮为［M + H］+  m / z：284.9。血浆样品处理方法为碱化后用乙醚提取。

结果：咪达唑仑、右美沙芬和奥美拉唑的线性范围为2 ～ 2 000 ng / mL，方法的回收率均大于85%，日内和日间的精密度均小于10%，且没有基质效应。

结论：该方法符合血浆样品的测定要求，可用于药代动力学高通量筛选中的“鸡尾酒法”研究



    本文由中国药科大学药物代谢与动力学研究中心的许潇，谢林，梁艳，陈卫东，刘晓东*，王广基等研究人员完成的863计划，国家高技术研究发展计划资助项目也是江苏省药物代谢动力学重点实验室资助项目的部分内容，现全文介绍如下。

    刘晓东为通讯作者：xdliu@cpu.edu.cn



前 言

临床前代动力学研究所采用的“鸡尾酒法”是指同时给予多种相对低剂量的探针药物（ 即CYP450 代谢酶亚型的底物），测定生物样本（尿、血液、唾液）中每个探针药物的代谢率或其他代谢分型指标，获取多个CYP 代谢酶亚型的表型信息。“鸡尾酒”技术快速简便，仅需要少量实验和动物就可以得到较多的药物代谢信息，是一种对药物的药代动力学特性进行高通量初步筛选的有效手段［1，2］。国家在《化学药物非临床药代动力学研究指导原则》中指出：对于创新药物，应观察药物对药物代谢酶，特别是细胞色素P450 同工酶的诱导或抑制作用［3］。因此，简便快速的“鸡尾酒法”将成为一个创新药物临床前药代的常用手段［4］。CYP3A、CYP2D6 和CYP2C19 是参与药物代谢的主要CYP450 代谢酶亚型，咪达唑仑（midazolam）、右美沙芬（dextromethorphan）和奥美拉唑（omeprazole）分别是常用的CYP3A、CYP2D6 和CYP2C19 的探针，因此，对上述3 种药物在血浆中的同时检测方法将为“鸡尾酒”法提供基本的技术前提和研究手段。



实 验

1 材料

1 .1 仪器

岛津LC-MS-2010 高效液相色谱-质谱联用仪（ADVP泵，在线真空脱气机，恒温自动进样器，柱温箱，电喷雾离子化接口的四极杆质谱检测器以及LC-MS-solution 色谱工作站），Milli-Q GradientA10 超纯水器（Millipore Inc.USA）。

1 .2 药品与试剂

咪达唑仑注射液（徐州恩华药业集团有限公司）；注射用奥美拉唑钠（扬州奥赛康药业有限公司）；咪达唑仑、右美沙芬、奥美拉唑和地西泮对照品（中国药品生物制品检定所）；甲醇（色谱纯，德国默克公司）；其余试剂（市售分析纯）；实验用水为超纯水。

2 方法与结果

2 .1 实验条件

2 .1 .1 色谱条件流动相：0 .01% 醋酸铵-甲醇（30 : 70）组成，流速：0 .2 mL / min。色谱柱：Shimpack ODS（250 mm × 2 .0 mm ID，5 .0 μm），柱温：40 ℃。

2 .1 .2 质谱检测参数质谱离子化方式：电喷雾离子化（ESI）；离子极性：Positive；选择性离子检测（SIM）：咪达唑仑为［M + H］+  m / z：326 .0，右美沙芬为［M + H］+  m / z：272 .1，奥美拉唑为［M + H］+ m / z：346 .0，地西泮为［M + H］+  m / z：284 .9。雾化气流速：4 .5 L / min；温度：250 ℃，电压：25 V；加热块（Block）温度：200 ℃；探针（Probe）电压：4 .5 kV；检测电压：1 .5 kV。

2 .2 血浆样品的处理

取血浆100μL，精密加入内标溶液（地西泮，5μg / mL）10μL，0 .2 mol / L 碳酸钠溶液100 μL，乙醚5 mL；振荡1 .5 min，3 500 r / min 离心5 min。取上清3 mL，置于40 ℃恒温水浴上，用氮气吹干。残渣用甲醇200μL 溶解，高速离心（18 000 r / min，10 min）

后，进样5μL 分析。

2 .3 血浆中标准工作曲线的制备及最低检测浓度测定

取空白大鼠血浆100μL，精密加入不同量的标准品，使其浓度分别为0，2，5，10，25，50，100，250，500，1 000 和2 000 ng / mL，按“2 .2”项下的方法操作，利用样品与内标峰面积比R 对样品浓度c 作直线回归，得到咪达唑仑回归方程：R = 0 .0015 c -0 .0023（ P < 0 .01，n = 5）；右美沙芬回归方程：R =0 .0017 c - 0 .0016（ P < 0 .01，n = 5）；奥美拉唑回归方程：R = 0 .0005 c + 0 .0017（ P < 0 .01，n = 5）。在上述条件下，咪达唑仑、右美沙芬和奥美拉唑的最低检测浓度均为2 ng / mL。

2 .4 方法的专属性

本实验条件下，咪达唑仑、右美沙芬和奥美拉唑及内标地西泮均有较大的色谱峰，血浆中杂质峰不干扰样品的测定，咪达唑仑、右美沙芬、奥美拉唑及内标地西泮均有较好的分离度，保留时间分别为：5 .1，4 .2，3 .2 和5 .5 min。如图1 ～ 4 所示，本法有较好的专属性。






2 .5 回收率测定

取试管加入空白血浆100μL，精密加入不同量的标准品，使其浓度分别为10，100 和1000 ng / mL，按照“2 .2”项下的方法操作，求得血浆中咪达唑仑、右美沙芬和奥美拉唑的回收率（结果见表1）

兴奋剂类分析方法系列讲座（39）（下）LC-MS 法同时测定大鼠血浆中

2 .6 方法的精密度试验

取空白血浆100 μL，精密加入不同量的标准品，使各药的浓度为10，100，1000 ng / mL，按照“2 .2”项下的方法操作，测定日内和日间变异。结果见表2。


2 .7 咪达唑仑、奥美拉唑和右美沙芬的基质效应考察

质谱的SIM 模式可选择性监测目标离子，灵敏度和专属性高，但与目标化合物同时进入离子源的内源性杂质可能会影响其离子化，这就是基质效应（matrix effect）。考察方法［5］如下：取6 只大鼠的空白血浆，按“2 .2”项下的方法操作，不加内标，挥干后加入10μL 不同浓度的标准工作液，挥干，加入复溶液200μL，使最终浓度为10，100 和1000 ng /

mL，每个浓度进样5 次，记峰面积为A1；另取不同浓度的标准工作液10μL，挥干，加入复溶液200μL，使终浓度亦为10，100 和1000 ng / mL，即排除空白血浆基质的干扰，每个浓度进样5 次，记峰面积为A2。内标（500 ng / mL）同样进行考察，结果见表3。如果A1 / A2大于85% 或小于115%，表明无基质效应存在（结果见表3）。以上结果表明4 种药物均无基质效应存在。


3 血药浓度测定及药动学参数

3 .1 动物实验

雄性SD 大鼠4 只，体重为（220 .25 ± 8 .88）g，精密称量3 种药物同时溶于生理盐水后股静脉给药，剂量为咪达唑仑（1 mg / kg）、右美沙芬（5 mg / kg）和奥美拉唑（5 mg / kg），于给药后5，10，30，60，90，120，180，240，360，480 和720 min 由眼底静脉丛取血0 .3 mL 于肝素化试管中，离心，取血浆于20 ℃冷冻保存，备用。

3 .2 药代动力学结果

SD 大鼠4 只分别静脉注射咪达唑仑、右美沙芬和奥美拉唑后血浆中药物浓度-时间曲线见图5，用BAPP 2 .0 程序求算其药代动力学参数（表4）



4 讨论

本文建立了用LC-MS 同时检测血浆中咪达唑仑、右美沙芬和奥美拉唑浓度的方法，具有专属性强，灵敏度高，快速简便的优点。分析所需血浆量少（只需100μL），适用于药物代谢动力学快速高通量筛选。

由于要将3 种探针同时监测，使3 种物质都得到较好的分离度，响应和回收率，故条件摸索时需要考虑兼顾各种因素，如选择流动相时发现含甲酸的流动相在增加右美沙芬的响应值的同时却会降低咪达唑仑的响应，而加入NH4Ac 50 mg 使各药响应均较好；另外在摸索提取条件时发现，血浆中的奥美拉唑只有被碱化才能被提取出来。

实现“鸡尾酒法”的一个关键技术就是用尽量少的血浆，以尽量低的检测限，同时检测几种探针的血浆药物浓度。各种探针的色谱条件，最大紫外吸收波长皆不相同，且同时给药后又产生了多种代谢产物，为色谱分离分析带来了很大的困难，虽然过去有文献报道使用HPLC-UV 法分别测定各个探针，但是很难做到同时检测，而且提取要求的血浆量大，检测限高，往往都在50 ng 以上［6］。而且，作为探针使用的药物应该使用尽量低的浓度给药，以防止探针药物之间发生相互作用，给实验带来不必要的误差，所以普通的HPLC-UV 法在“鸡尾酒”技术中受到很大的局限，而用专属性灵敏性高的LCMS测定法具有较大的优越性。

经实验证明，大鼠静脉注射咪达唑仑、右美沙芬和奥美拉唑之后，用本方法测得的药代动力学参数与文献报道的基本相符，如奥美拉唑和咪达唑仑的半衰期分别为28 min 和41 min，从血浆中消除速度很快［6，7］。说明本研究建立的LC-MS 测定法可以用于进一步的“鸡尾酒”技术研究。

兴奋剂类分析方法系列讲座（40）洛伐他汀缓释片在人体内的药代动力学研究

洛伐他汀缓释片在人体内的药代动力学研究


摘 要
目的：研究洛伐他汀缓释片在人体内单次和多次口服给药后的药代动力学过程。
方法：采用LC-MS/MS方法测定人血浆中洛伐他汀的浓度。采用正离子方式检测；扫描方式为选择离子反应监测（SRM）。20名男性健康受试者随机双交叉单次（40名高）或多次（20mg×6）口服洛伐他汀缓释片和普通制剂海立片，并于相应的时间点取血测定血浆中的药物浓度。
结果：所建立的LC-MS/MS方法的线性范围为0.05~10.0ng/mL，最低检测浓度为0.05ng/mL。以海立片为参比对照，用面积法估算的单次和多次给药后洛伐他汀缓释片中洛伐他汀的相对生物利用度分别为（148.5±43.1）%和（140.7±32.8）%。估算单次给药后海立片和洛伐他汀缓释片的人体内洛伐他汀的MRT为（14.61±7.27）h 和（29.72±17.22）h；tmax为（4.2±2.1）h和（12.3±7.5）h；cmax为（1.98±1.01）ng/mL 和（1.64±0.62）ng/mL；t1/2为（12.16±5.18）h 和（18.17±10.78）h。海立片和洛伐他汀缓释片的稳态药物浓度分别为（0.57±0.27）ng/mL和（0.80±0.43）ng/mL，波动度分别为（2.64±1.10）和（0.97±0.36）。
结论：单剂量给药后洛伐他汀缓释片与海立片相比，产生的cmax比较平稳，tmax延迟，两种给药方式洛伐他汀缓释片的吸收程度均高于普通制剂。

    本文由孙建国1，翁合霞2，王广基1*，李鹏1，李昊1（1,中国药科大学药物代谢动力学重点实验室，2,南阳医学高等专科学校）等研究人员共同完成的“八六三”计划中的基金资助项目。王广基为通讯作者：电话 025-83271544/83302827  Email: gjwang@cpu.edu.cn

前 言
洛伐他汀为甲基羟戊二酰辅酶!（HMG-CoA）还原酶抑制剂，为临床上广泛应用的新一代降血脂药物。目前国内仅有洛伐他汀普通片，通常采用每日( 次口服20mg, 的给药方案，必要时剂量可调至80mg一次或分两次服用。有研究报道［1］，一日两次，每次口服20mg, 洛伐他汀的降血脂作用强于每日1 次.40mg的服药方案，该研究结果促使了洛伐他汀缓释制剂的研发。本实验以洛伐他汀普通片（海立片）为参比制剂，评价洛伐他汀缓释片的生物
利用度和缓释效果，估算其药代动力学参数，为临床用药提供依据。

实 验
1  材料
1.1  仪器与药品
TSQ型高效液相色谱%质谱质谱联用仪（LC-MS/MS，美国finnigan 公司），配有电喷雾离子源（ESI），Xcalibur数据处理系统，LCQuan 2.0定量软件；SPD1010离心浓缩装置（美国Thermo公司）。
洛伐他汀缓释片（20.0mg/片，批号：20040412，国内某公司研制）；洛伐他汀对照品，辛伐他汀（内标，中国生物制品药品检定所）；海立片（20mg/片，批号020301，浙江海正药业股份有限公司）
2  方法
2.1  血浆中洛伐他汀LC-MS/MS测定方法
2.1.1  色谱和质谱条件    流动相：1μmol / L醋酸钠溶液-乙腈（10:90），色谱柱：Shimadzu-ODS (150mm×2.1mm×5μm，日本岛津公司）；流速：0.2mL/min；柱温箱温度：.40℃。
洛伐他汀测定的质谱检测参数和电喷雾参数如下：离子源为ESI源；离子喷雾电压为.4.5K V，加热毛细管温度为350℃；鞘气（N2) 流速25Arb；辅助气（N2) 流量5Arb；碰撞气（Ar）压力1.5Pa，碰撞诱导解离电压为24eV；正离子方式检测；扫描方式为选择离子反应监测（SRM）。用于定量分析的反应离子分别为m/z:441.20（洛伐他汀［M+Na］+）→
325.20，m/z：427.20（ 辛伐他汀［M+Na］+）→.325.20；二极全扫描，扫描时间为0.2s。
2.1.2  血浆样品的处理
于离心管中加入血浆200μL加入内标50ng/mL 辛伐他汀10μL，混匀，然后加入乙酸乙酯800μL，涡旋振荡2min，于8000r/min离心5min。取上层有机相500μL于另一离心管中，于离心浓缩装置中挥干。用乙腈200μL溶解残渣，涡旋振荡60s，于15000r/min 离心10min，吸取120μL上清液于自动进样瓶中，进样量10μL。
2.2  洛伐他汀缓释片人体中单次和多次给药后的药代动力学及其相对生物利用度研究
2.2.1  健康受试者选择
20名男性健康志愿受试者；年龄为22~24 岁；体重为65.1±4.2kg，受试者均签署知情同意书，并经临床试验机构伦理委员会审核通过。
2.2.2          实验方案
采用双交叉试验设计方案，即将20名男性健康受试者按体重随机分成两组。单次给药时一组先口服.40mg（20mg×2片）洛伐他汀缓释片，另一组先口服. 40mg（20mg×2片）海立片，两周后交叉给药。受试者于早上7：00空腹服药，用200mL温开水送服。服药后2h内不饮水，4h后统一饮食洛伐他汀缓释片于服药1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0、11.0、14.0、24.0、30.0、36.0、48.0h ，洛伐他汀普通片于服药后0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0、11.0、14.0、24.0、36.0,h于肘静脉取血3.0mL；血样于4000r/min 离心5min，取血浆于-80℃冷冻保存，直至分析。
上述20名健康受试者继续进行多次给药后稳态血药浓度及波动度研究。洛伐他汀缓释片和海立片均每日1次，每次1片（20mg），连续6d于每日上午7:00用温开水200mL 送服。采用监测给药后24h 洛伐他汀谷浓度来判断药物是否达稳态。第6天，受试者分别于早上7：00 服药前取血；第6 天，受试者于早上7：00 取血后，空腹服药，3h 后统一进餐，并按单次给药后的采血时间进行取血保存。样品分析前，血浆在37 ℃恒温水浴中融解后提取。两种制剂间隔两周交叉服药，方法同上。
2.2.3          数据分析
将所得血药浓度%时间数据在计算机上用末端相浓度取自然对数后对时间回归进行计算，求得表观消除速率常数λn。cmax及tmax均为实测值；计算末端相消除半衰期（t1/2 )、曲线下面积（AUC）和平均驻留时间（MRT），药代动力学参数用药代动力学程序BAPP2.1进行验证。
本文测定洛伐他汀缓释片（T）在人体中药代动力学及其相对生物利用度，以海立片（R）为标准对照。相对生物利用度计算公式为：



所得参数（ cmax、tmax、AUC0-tn）用交叉实验设计的方差分析，其中cmax和AUC0-tn先进行自然对数转换后进行方差分析，并进行双单侧t检验（显著性水平α＝0.05）和90%置信区间（α＝0.05）检验；tmax和波动度（DF）采用Wilcoxon法进行检验。
2.3  临床观察内容
受试者服药后在临床观察室停留24h，观察受试者的耐受性和不良反应发生情况以及一般情况。
3  结果与结论
3.1  血浆中洛伐他汀的LC-MS/MS 法测定结果
建立的人血浆中洛伐他汀浓度的LC-MS/MS检测方法，血浆中杂质不干扰样品的测定，在0.05~10.0ng/mL 范围内线性关系好（r =0.9995）。本研究采用该方法进行了人血浆中洛伐他汀的绝对回收率测定、介质效应的考察、方法的精密度试验及洛伐他汀在人血浆中的冻融稳定性试验，人血浆中4℃存放6h 以及溶剂系统（乙腈）中24h 的稳定性试验等的LC-MS/MS 方法学考证。结果表明在0.10、1.0、5.0ng/mL 3个浓度范围内，血浆中洛伐他汀的提取回收率分别为（78.31±3.47）%，（73.82±2.76）%，（77.91±2.75）%（n =5），最低检测浓度为0.05ng/mL，介质效应无明显个体差异。高、中、低浓度的批内和批间变异系数均小于15.0%。样品的冻融稳定性试验、人血浆中4℃存放6h 以及溶剂系统中24h的稳定性试验结果表明在本测定条件下，样品较稳定，未见明显降解。方法学质量控制和样品测定过程中质量控制结果见表1，结果表明该方法符合生物样品分析要求。

兴奋剂类分析方法系列讲座（40）（下）洛伐他汀缓释片在人体内的药代动力学研究

3.2  洛伐他汀缓释片在人体中药代动力学及其相对生物利用度研究结果
健康受试者单剂量口服洛伐他汀缓释片和海立片后洛伐他汀的血药浓度-时间曲线见图1。


采用双交叉试验设计方案，即20名男性健康受试者随机双交叉口服洛伐他汀缓释片40mg（20mg×2片）和海立片40mg（20mg×2片）后用LC-MS/MS法测定血浆中洛伐他汀的浓度。以参比制剂海立片为参比对照，用面积法估算洛伐他汀缓释片中洛伐他汀的相对生物利用度为（148.5±43.1）%。估算的参比制剂海立片和洛伐他汀缓释片的药代动力学参数见表2。洛伐他汀缓释片及海立片服用后血浆中洛伐他汀的AUC0-36、Cmax 经对数转换后的方差分析和双单侧! 检验结果表明，两制剂吸收程度不等效。t max经非参数检验（Wilcoxon法检验）结果表明，两制剂有显著性差异。受试制剂中洛伐他汀与参比制剂相比，产生的Cmax 比较平稳且t max延迟，提示受试制剂具有缓释效果。受试制剂的吸收程度高于参比制剂，与文献［1］报道一致。


3.3  洛伐他汀缓释片稳态血药浓度及波动度的研究结果
20名男性健康受试者按随机双交叉实验设计，每日4 次，每次口服4 片国内某公司研制的洛伐他汀缓释片或每日1 次，每次口服1片参比制剂浙江海正药业股份有限公司生产的海立片，5d后血药浓度达到稳态水平。第6天上午7.00口服1片的洛伐他汀缓释片或1 片海立片后测定经时过程的洛伐他汀血药浓度，结果表明，稳态时受试制剂的相对生物利用度值为（140.7±32.8.）%，参比制剂和受试制剂的波动度（DF）分别为 2.64±1.10和0.97±0.36（见表3）。


两制剂中洛伐他汀的AUC0-36、Cmax和Css经对数转换后的方差分析结果表
明有显著性差异；双单侧t检验结果表明两制剂吸收程度不等效。t max和DF经非参数检验（wilcoxon符号秩检验）结果表明，两制剂有显著性差异，受试制剂的t max较参比制剂延迟，DF下降。结果表明：多剂量给药时，受试制剂的吸收程度高于参比制剂，受试制剂与参比制剂相比洛伐他汀在吸收程度与吸收速度均不等效，受试制剂的稳态浓度较平稳，结果见图2。


3.4  临床观察结果
受试者在实验期间均未出现明显不良反应。

4  讨论
在前期工作中，我们研究了犬体内洛伐他汀缓释片的药代动力学和生物利用度［2］，结果表明该缓释片具有一定的缓释效果。进一步的人体药代动力学预实验研究表明在中国人体内洛伐他汀药物峰浓度较低，且LC-MS 干扰较多，因此采用LC-MS/MS 提高检测的灵敏度。文献［3］报道了大鼠体内洛伐他汀的LC-MS/MS检测方法，其最低定量限为0.5ng/mL，不能满足本实验的要求。在该方法基础上本文建立了人血浆中洛伐他汀的IHMQR J QR
检测方法，采用微量血浆（(200μL血浆）提取，血浆的离子抑制效应低，采用选择离子反应监测（SRM），基线噪音大大降低，信噪比有了很大提高，最低检测浓度为0.05ng/mL样品和内标出峰时间接近，质谱参数基本一致，从而保证了方法的重现性。
Lamson［4］等人研究表明在10~40mg/次剂量范围内人体内洛伐他汀的Cmax 和AUC与剂量呈线性相关。单次给药后洛伐他汀缓释片的人体生物利用度为普通片的1.5 倍［5］（缓释片和普通片的峰浓度分别为（4.0±2.0）ng/mL，（6.7±4.0）ng/mL，连续给药28d 后，洛伐他汀缓释片的人体生物利用度约为普通片的2倍（缓释片和普通片的峰浓度分别为（5.5±2.5）ng/mL，（7.8±8.1）ng/mL，说明缓释片的生物利用度比普通片有较大提高。本文研究结果表明，在中国人体内单次或多次给药后洛伐他汀缓释片生物利用度比普通片均提高了约
50%，达峰浓度低于文献报道，表明洛伐他汀在中国人和白种人体内的药代动力学有一定的种族差异。洛伐他汀缓释片生物利用度提高的原因有待进一步研究。

楼主，你贴这么多够幸苦的，兴奋剂目录每年1月1日都会更新，你的目录还是2006年的，out啦

有些方法够落后的，在当时还行。不过也够辛苦的了！

（41讲）


唾液中滥用药物分析及其与血液中药物浓度的相关性



摘 要 

      唾液是一种成分简单、易于采集的体液，某些药物在唾液中的浓度可以反映其血药浓度。本文分析了滥用药物进入唾液的机制和影响因素，综述了唾液中滥用药物分析时样品的采集、前处理和检测方法以及唾液与血液中药物浓度的相关性。 认为唾液是临床和法医学方面很有价值的分析样品，用唾液中滥用药物浓度来推测血药浓度具有一定的法医学意义。



      本文由山西医科大学法医学院的李鹏旺、王玉瑾、刘俊芳共同完成的山西高校科技研究开发项目和自然科学基金资助项目的部分内容，现全文介绍如下。第一作者的联系方法：0351-4135142  lpw991005@yahoo.com.cn



前 言

      常规体内滥用药物的检测主要是选用尿液、血液或器官作为检验材料，但在现场检测滥用药物时，唾液较血液易于采集，可避免因抽血带来的身体不适、晕血及感染等，且具有不侵害他人隐私、不受时间!地点的限制、无须对收集人员进行专门训练、可防止掺假替换等优点，是滥用药物现场检测较好的生物检材[1~3]。近年来对于唾液与其他体液中药物含量相关性的报道较多[2~8],用唾液代替血液在临床研究、治疗药物监测以及吸毒者滥用药物的分析等方面均有重要意义。



实 验

1        滥用药物进入唾液的机制及影响因素

      唾液是一种由腺体分泌的蛋白含量很低的液体$ 唾液与血浆药物浓度比(saliva/plasma,S/P)主要由药物经血液进入唾液的转移机制所决定.。对滥用药物而言，可能的路径主要为被动扩散、主动转运和超滤作用[9~11]。 唾液中药物浓度的影响因素包括药物的分子量、脂溶性、药物特性、分子空间结构、电离度（pKa）、游离态药物水平、血液和唾液中的药物血浆蛋白结合率及唾液pH值和流速等[9,12]. 一般来说，药物分子量越小，脂溶性越高，药物跨膜转运的透过率越高，但目前认为分子量和脂溶性是次要影响因素，药物的pKa 和蛋白结合率及唾液的流速、pH 值是S/P 的重要影响因素[12]。 高蛋白结合分子不可能进入唾液[11]，因而药物蛋白结合率对唾液药物水平有显著影响[13]。此外，唾液pH值!唾液流量对唾液中药物浓度也有一定影响[9]。影响S/P 的另一因素是动静脉循环[3]。和药物在口腔前庭的吸收。 例如"四氢大麻酚（THC）以被动扩散方式进入血液，大部分在血中与蛋白质相结合，所以唾液中的浓度非常低。若检出唾液中THC浓度很高，则意味着此为吸食大麻烟时口腔粘膜的药物分子残留所致[14]



2  唾液中药物的分析研究

2.1  唾液的采集

      唾液的采集方法多种多样[12]根据是否受到刺激分为非刺激法(自然取样法)和刺激法。非刺激法条件下唾液直接流入容器内，流速慢，仅约0.05mL/min。刺激法分为物理刺激法和化学刺激法：物理刺激法即放置固体石蜡，橡皮条或棉球等物质于口腔中，刺激唾液分泌，流速为1~3mL/min；化学刺激法是用酸刺激味觉或者毛果芸香碱刺激唾液分泌， 流速可达5~10ml/min。 目前商品化的唾液采集装置相继出现，如棉花卷[10]、专用的唾液收集管[2]、以及口腔标本采集装置等[15]。Crouch[16]研究发现，采集方法对唾液中药物浓度有显著影响$，实验证明唾液中可待因的平均浓度在非刺激条件下比酸刺激条件下高3.6倍,比机械性刺激低50%，是商品化采集装置的77%。Shellee[2]的实验证明,酸刺激组和非刺激组相比，非刺激组唾液与血液药物浓度相关度（0.901） 明显高于酸刺激组（0.872） 说明酸刺激采集对唾液与血液药物浓度相关性有不利影响.

2.2  唾液的前处理

      为提高唾液中药物检测的准确度和灵敏度，在仪器分析前必须对唾液进行必要的前处理。常用的前处理方法主要有液-液萃取和固相萃取。 液-液萃取技术利用样品中不同组分分配在两种不相混溶的溶剂中，以溶解度或分配比的不同来达到分离、提取或纯化的目的，所用设备简单，操作容易，被广泛应用于滥用药物的分析[1,17,18]。液-液萃取法的缺点是需要消耗大量有毒有害的有机溶剂、繁琐费、萃取过程中易发生乳化现象而影响萃取率、难以实现自动化等。 固相萃取克服了以上缺点， 唾液中药物固相萃取处理时，洗脱溶剂多为以水为主的溶剂系统，毒性小，无乳化现象，不易引入杂质[3]。Navarro等[3]建立了固相萃取提取唾液中的亚甲基二氧基甲基苯丙胺（MDMA）和亚甲基二氧基苯丙胺（MDMA）的方法，回收率分别为90%和92%。自动固相萃取装置可一次性连续萃取100多个唾液样品，增加了样品的处理量，减少了溶剂的使用，重现性更好。

2.3  唾液的检测方法

      目前唾液中滥用药物及其代谢物常用的分析方法包括酶免疫测定法（EIA）放射免疫测定法（RIA）气相色谱法（GC）、气相色谱F质谱联用法（GC-MS）、高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱-质谱联用法（LC-MS）等。

免疫测定法（IA）是利用抗原抗体免疫反应原理来检测滥用药物，包括EIA、 RIA 等多种方法。EIA 和RIA法常用作筛选，还需GC-MS 或LC-MS来确证。用免疫试剂条现场检测滥用药物的报道很多，该法简便快速，但易出现假阴性，只能用作初筛[19,20]。

      Niedbala等[15,21]建立了唾液样品中阿片和大麻的EIA 筛选法，用GC-MS/MS法定量，检材量可低至2.5×10^-10L具有很高的灵敏度。Huestis等[6]则用RIA法测定受试者唾液中THC，结果与GC-MS分析结果一致。Kintz等[19]报道用免疫试剂盒检测唾液中可待因， 检测限为100ng/mL。如果药物浓度太低、唾液中存在干扰物或者操作失误等，都有可能导致假阴性的出现， 近年来对于唾液中乙醇试剂盒的研究也很多，曾立波等[20]利用酶学原理， 对唾液中乙醇含量进行半定量， 与GC-MS法定量结果基本一致，检测过程仅需2min 灵敏度高,特异性好，适合现场使用。

      GC法已广泛应用于滥用药物的唾液分析。Gubala{7}用GC-FID 法检测唾液中乙醇浓度， 日间精密度（RSD）为3.6% 但GC 法对于挥发性较差的目标物，需采用制备衍生物或裂解等方法以增加其挥发性。

      GC-MS法可以得到被测物的分子结构信息$特别适合于未知滥用药物的分析。Campora 等[18]建立了GC-PCI-MS 检测唾液中可卡因及其代谢物的方法$检测线性范围25~1000ng/mL重现性好，回收率接近100%。爱康宁甲酯(EME)的检出限LOD为0.9ng/mL，可卡因为2.2ng/mL，苯甲酰爱康宁（BEG）为0.2ng/mL。质谱检测器在使用全扫描时，对较低浓度的样品要求预富集，选择离子监测（SIM）可以使灵敏度大幅度提高， 但降低被测物的定性信息，Cognard 等[22]用GC-MS-MS定量分析唾液样品中可卡因及其代谢物，在不降低定性信息的前提下使得选择性和灵敏度都有很大的提高，

      与GC 法相比，HPLC适用范围更广， 李俊杰[4]用HPLC荧光法检测唾液中的乙醇含量， 流动相为0.1mol/L醋酸胺溶液和63%乙腈，方法回收率达95%。以上，日内和日间RSD 均小于5%，重现性较好，唐哲等[23]建立了HPLC 检测唾液中的卡马西平的方法，方法平均回收率可达99%以上， 日内和日间RSD 分别为2.6%~4.9%和3.0%~8.6%

      LC-MS或LC-MS/MS具有液相色谱的高效在线分离能力和质谱的高选择性、高灵敏度的检测能力，越来越多地用于唾液中的滥用药物分析。Mortier等[24]建立LC-MS法同时检测唾液中可待因、吗啡、苯丙胺、可卡因及其代谢物BEG 等，样品经固相微萃取处理后进行LC-MS分析，回收率达90%以上。Wood等[25]建立了唾液和血液中苯丙胺的LC-MS/MS 定量分析方法，操作简便且样品用量少。



3  唾液与血液中药物浓度相关性的研究

      血药浓度在临床药物监测和法医学鉴定中是一个重要的参数，可为中毒判断提供直接依据， 但血液的采集和样品前处理比较麻烦， 而唾液样品较易采集，样品成分简单，前处理方便，鉴于许多药物在血液与唾液中的浓度密切相关，可以考虑用唾液代替血液作为药物监测的样本，唾液与血液中药物含量的相关性研究，可以为滥用药物的现场检测和法医学鉴定提供理论基础

      关于唾液和血液中滥用药物尤其是精神药品相关性的研究已相当广泛，大多数精神药品血药浓度和唾液药物浓度具有很好的相关性。Shellee等[2]对左乙拉西坦（LEV）进行了研究，血液和唾液样品在两个不同的实验室进行测定，线性回归评价其相关性，唾液与血液左乙拉西坦平均浓度比在两实验室的测定结果分别是（41.0±0.15）和（.36.0±0.15）两实验室的相关系数（r）无显著性差异，分别为0.87和0.86（P <0.0001）认为唾液和血液LEV浓度呈显著关。              林中等[8]对四种抗癫痫药物在唾液与血清中浓度的相关性进行了研究，结果显示，四种药物在唾液与血清中的浓度之间有较好的线性关系，其r 分别为：卡马西平0.9760；苯妥英钠0.9556；苯巴比妥0.9620；丙戊酸钠0.9286，可根据唾液药物浓度来计算相应的血药浓度值。研究证明，多种毒品血药浓度和唾液药物浓度也具有良好的相关性。O’Neal等[5]对口服可待因后血液和唾液中可待因含量进行分析，结果显示，用药后2h可待因S/P基本保持稳定（S/P = 3~4）。在吸收相、唾液与血液相关性强（r = 0.809, P <0.05）平均S/P保持常量（M = 3.7）。因此推论，可以用唾液中可待因来估计血液的可待因浓度。 Huestis 等[6]同时采集吸食大麻后唾液和血液样本GC-MS法分析其中THC 吸食后0.3~4.0h,THC平均S/P为1.18两者具有相关性。Navaeeo等[3]对唾液和血液中甲基苯丙胺浓度相关性进行了研究，发现甲基苯丙胺的S/P为32.3~1.2,1.5h达到峰值， 其比值为.18.1且S/P 受唾液pH值的影响。Gubala等[7]检测了唾液和血液中酒精浓度，结果显示唾液和血液酒精浓度也存在高度的相关性。



4  展望

      生物样品中滥用药物的检测受到越来越多毒物分析工作者的重视，而寻求一种快捷、简便、灵敏、准确的分析方法和简便的样品采集装置尤为重要。唾液检测具备采样方便、操作简单等特点，可以用于现场快速检测，其检测方法也逐步走向自动化、快速化，已成为滥用药物的法医学检验鉴定的一个重要方法。但唾液中药物检测受到采集技术与方法、 药物特性、给药途径、个体差异、年龄、机体生理疾病及情绪状态等因素的影响较大，因此应逐步建立唾液采集标准方法和检测标准。唾液中滥用药物的检测技术在今后会趋于成熟，并有重要的应用价值。