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液相色谱（LC）
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主题：【求助】HPLC基线不稳以及峰展宽

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yiqingyiyu
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发表于：2009/11/09 23:04:02 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
求助各位大虾,我近日来做HPLC遇到如下两个问题:
1、我用的是waters e2695HPLC，紫外检测器，流动相是乙腈-0.2%甲酸=50：50，均过0.45um滤膜，检测波长在230nm的时候发现基线总是走不平，出现连续上下波动的尖锐峰，AU值只能稳定在3个零，第4位就出现很大变化，峰面积在1万到2万，不知道是什么原因引起的基线不稳，应该不是气泡问题吧，因为柱压变化基本在5psi
2、今天做实验突然发现色谱峰比以前变宽的很厉害，拖尾严重，用的是菲罗门的柱子（使用不到半年），换了一根waters的新柱子后，同样的条件峰形就变好了，是不是柱子污染了，能不能反冲来解决？
因为我做的化合物只在230nm有吸收，而且都是低浓度的，基线波动那么大，基本上没法做了，，请大家一定帮忙解决啊，非常感谢非常感谢！
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〓猪哥哥〓
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2009/11/10 7:54:17 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
柱子有些污染，压力和原来相比增加了多少？维护一下再试试。
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yiqingyiyu
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2009/11/10 10:48:27 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 〓猪哥哥〓(03yx2) 发表:
柱子有些污染，压力和原来相比增加了多少？维护一下再试试。

压力和以前相比好像没有增加多少,用甲醇和水走梯度冲了一下,还是不能缓解峰展宽哦
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kubile2005
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2009/11/10 15:12:32 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
换上一根新的Waters柱子，峰形就好了
那么很有可能phenomenex的柱子柱效下降了，建议重新测一下柱效
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〓猪哥哥〓
03yx2
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2009/11/10 21:31:39 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 kubile2005(kubile2005) 发表:
换上一根新的Waters柱子，峰形就好了
那么很有可能phenomenex的柱子柱效下降了，建议重新测一下柱效


用苯，甲苯等测下柱效看看。
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柏坡
hgycook
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2009/11/10 22:15:06 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
也有可能是柱连接的不好，菲罗门的柱子换到其他机器上试试？

基线尖锐波动也有可能是检测器里有气泡。
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哇咔咔
feixue810316
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2009/11/11 9:15:47 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
菲罗门的柱子,寿命貌似就是有点短
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gonghaofan
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2009/11/11 16:07:18 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如果使用半年就污染了，最好还是使用保护柱比较节约色谱柱
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yiqingyiyu
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2009/11/14 21:03:06 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢各位的热心帮助，我后来把柱子反接，用纯甲醇0.2的流速冲了5个小时，再正过来用就好了，回想了一下，之前进过正辛醇，没有稀释，可能是正辛醇对柱子不好。
基线尖锐波动的原因还没找到，怎么排气泡都不管用，但是在420nm波长下基线就非常稳定，打算看看同型号的其他仪器有没有这个问题
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Last edit by yiqingyiyu
青橙
chengf3526
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2009/11/15 15:57:37 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是不是甲酸在230nm处有吸收啊？
羧酸基的最大吸收波长在203nm
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Last edit by chengf3526
syqjy
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2010/5/13 11:42:34 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
应该与乙酸是有点关系的，我之前也出现这样的问题，后来把乙酸换掉后就好了。。
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