主题：【资料】近年国内固相萃取-色谱分析的进展(56讲 待续)

近年国内固相萃取-色谱分析的进展(22)

      这一讲座是有关近年国内固相萃取-色谱分析的进展的综述报告，它的浓缩性综述论文发表在《分析试验室》,2007,26(2):100-122上。本讲座是对这一综述的展开性报告的第11部分.——固相萃取-色谱分析在水质分析中的应用（13）
．固相萃取-色谱分析在水质分析中的应用（见表2-1）

表 2-1  固相萃取-色谱分析在水质分析中的应用2-13

序号 题目 摘要 SPE 文献
73 高效液相色谱测定水中微囊藻毒素 研究了应用 HPLC 测定水中微囊藻毒素的方法， SPE处理样品，用C18色谱柱，以甲醇-水（含0.05% 三氟乙酸）（40：60）为流动相进行分离。
样品制备：  C18  小柱 C-73
74 用四- (对氨基苯基) - 卟啉柱前衍生的高效液相色谱法测定重金属
  研究了用固相萃取富集、快速分离柱高效液相色谱法测定环境水样中镍、锡、铅、镉、汞5种重金属的方法。环境水样中的镍、锡、铅、镉、汞用四- (对氨基苯基) - 卟啉( T4APP)柱前衍生,然后用ZORBAX RP18固相萃取小柱萃取富集镍、锡、铅、镉、汞的T4APP络合物,经富集后的络合物用甲醇- 丙酮(体积比95 ∶5)为流动相, ZORBAX Stable Bound (4. 6 mm ×50 mm, 1. 8μm)快速分离柱为固定相分
离,用二极管矩阵检测器检测。镍、锡、铅、镉、汞的检测限分别为4, 5, 4, 3, 3 ng/L,分离5种重金属元素络合物的时间只需2. 0min,相对标准偏差为2. 2% ～4. 1% ,加标回收率为88% ～104%。 ZORBAX RP18 固相萃取小柱,30 μm, ,,安捷伦公司
  C-74
75 圆盘固相萃取-GC/ MS/ SIM 法在水体有机氮磷农药测定中的应用研究
  通过有机氮磷农药测定的样品前处理技术2圆盘固相萃取、GC/ MS 的测定技术2选择离子跳变扫描SIM 的应用研究,建立了水体中有机氮磷的分析测定方法. 其方法检出限达到了ng/ L 级的水平
  圆盘 SPE 装置及 47 mm ENVI-C18  固相萃取膜supelco 公司 C-75
76 高效液相色谱- 电喷雾电离质谱联用法测定水中痕量五氯酚研究
  建立简便、灵敏、准确的测定水中痕量五氯酚的固相萃取- 高效液相色谱- 质谱联用的检测方法,并用于生活饮用水、渔塘水中痕量五氯酚的污染监测。水样经OasisÒHLB小柱富集,以甲醇- 甲基叔丁基醚(10 + 90)洗脱,采用甲醇和2 mmol /L 醋酸铵溶液为流动相进行梯度淋洗,以ZORBAX Eclip se XDB - C18柱( 150 mm ×211 mm ×5μm) 分离,通过选择性离子检测( SIM)及电喷雾电离离子化技术进行测定。结果:线性范围为510μg/L～50010μg/L,定量检测下限为510 ng/L,方法回收率在8218%～10815% , RSD均小于10%。 Oasis HLB 拄  3 ml，60 mg,
Waters公司)
  C-76
77 高效液相色谱法同时测定制药废水中的交沙霉素、茶碱及扑热息痛
  建立了同时测定制药废水中残留的交沙霉素、茶碱、扑热息痛等3 种药物的高效液相色谱方法。样品经固相萃取处理后进行色谱分析。采用的色谱条件:色谱柱为Hypersil ODS 柱(416 mm i1 d1 ×200 mm) ; 流动相A 液为01025 mol/ L KH2 PO42H3 PO4缓冲液(pH 2175) ,流动相B 液为甲醇;梯度洗脱;紫外检测波长为230 nm(交沙霉素) 、272 nm(茶碱) 、243 nm(扑热息痛) 。制药废水中3 种药物的加标回收率均高于93 %, 相对标准偏差( n = 6) 小于211 %,检测下限( S/ N = 3) 不高于110μg/ L 。 C18 固相萃取小柱
  C-77
78 固相萃取-GC 法测定水样中马拉硫磷残留
  采用C18 小柱萃取水样中的马拉硫磷，以毛细管柱气相色谱氢火焰离子化检测器 (FID)测定，检测限为0.12 μg/L，并试验了固相萃取步骤中样品流量和洗脱剂对回收率的影响。结果表明，样品流量为6 mL/min，以二氯甲烷为洗脱剂时，回收率较好。同时对蒸馏水、地下水和河水中添加测定，其平均回收率在79.0%～109.2%之间。 C18 小柱 ，3 mL ，200 mg
  C-78
79 水和沉积物中石油类污染物的定量分析和质量控制
  参照美国EPA方法和国家标准, 采用固相萃取和索氏提取-GC/FID/MS分析, 分别对水、沉积物中的污染物进行测定, 并对方法空白、基质加标、空白加标进行试验.
样品制备：准确称取15g的沉积物样品干样, 置于索氏提取器中, 同时加入一定量的回收率指示物5α2雄甾烷和萘-d8 , 二氢苊-d10 , 菲-d10 ,-d12 ,以250ml的二氯甲烷/己烷1∶1为提取剂索氏提取, 提取液在硅胶/氧化铝净化柱上进行净化, 用15ml正己烷和70ml二氯甲烷/正己烷3∶7提取正构烷烃和芳香烃. 上述两种淋洗液再次用旋转蒸发仪浓缩到1ml, 加入2ml正己烷, 蒸发到015ml, 用正己烷溶剂定量转移到KD浓缩器刻度量管中, 分别添加正构烷烃和多环芳烃的内标化合物: n2C24D50和六甲基苯10μl并用高纯氮吹蒸定容至1ml后冷藏待分析
  硅胶/氧化铝净化柱 C-79


文献
C-73 徐荣，张德明，卢益新，净水技术，2005，24（5）：
C-74 李 明,艾华林,柴跃东等，化工环保，2005，25（5）： 412415
C-75 陈晓秋，析测试技术与仪器，2005，11（2）：123～127
C-76 金米聪,陈晓红,李小平等，中国卫生检验杂志，2005，15（3）： 280～282
C-77 黄晓兰，许玫英，色谱，2005，23（3）： 296～298
C-78 唐建设，项 丽，现代农药，2005，4（4）：23～24
C-79 郭 伟,何孟常,杨志峰等，环境化学,2006，25,（5）：652～653

近年国内固相萃取-色谱分析的进展(23)

      这一讲座是有关近年国内固相萃取-色谱分析的进展的综述报告，它的浓缩性综述论文发表在《分析试验室》,2007,26(2):100-122上。本讲座是对这一综述的展开性报告的第24部分.——固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用(1)

3．固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用

      测定奶制品和肉类食品分析中的兽药残留及其他有害物质，由于含量低、样品复杂给样品处理带来较大的困难，使用固相萃取进行样品的富集和净化是很好的途径，例如使用HPLC-MS 测定牛奶中12种糖皮质激素的残留[D-1]，就采用液液萃取、Oasis HLB 固相萃取柱浓缩净化、硅胶柱和氨基柱进一步净化技术,测定了12种糖皮质激素残留的含量，这一方法灵敏度高,检出限低,分析时间短。国内近两年使用固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用论文见表 3-1

表 3-1  固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用(1)
序号 题目 摘要 使用SPE柱 文献
1 超高效液相色谱-串联电喷雾四极杆质谱法同时测定牛奶中12种糖皮质激素的残留
  用超高效液相色谱-串联电喷雾四极杆质谱(负离子模式)在多反应监测(MRM )模式下测定了牛奶中12种糖皮质激素的残留。试样中加入pH 5.20的醋酸盐缓冲溶液和甲醇,超声提取,以去除部分蛋白质,然后用正己烷脱脂,依次经HLB 柱、硅胶柱和氨基柱等固相萃取柱浓缩和净化后,通过 Waters ACQU ITYU PLCTM BEH C18色谱柱分离,以甲醇和含0.1%甲酸的水为流动相进行梯度洗脱。在超高效液相色谱-质谱分析过程中以保留时间和离子对(母离子和两个碎片离子)信息比较进行定性,以母离子和响应值高的碎片离子进行定量
样品制备：　称取5.0 g均匀的牛奶试样,置于50 mL 离心管中,加入10 mL 0.2 mol/L pH 5.20的醋酸-醋酸钠缓冲溶液和 35 mL 甲醇, 超声振荡5 min, 于0℃、10 000 rpm条件下离心10 m in。离心分离后,将上清液置于分液漏斗中,用20 mL 正己烷萃取两次, 弃去正己烷层, 以去除其中的脂肪。取下层溶液,加入5 mL 正丙醇,于45 ℃水浴上旋转蒸干,残渣用8 mL 甲醇和32 mL 水的混合液溶解, 溶液用于固相萃取。　　HLB SPE 柱依次用6 mL 甲醇、6 mL 水活化后,将试样溶液过柱,先用6 mL 水淋洗,再用6 mL 甲醇洗脱。收集洗脱液, 用氮气吹干后加入3 mL 正己烷溶解,过硅胶柱(硅胶柱预先用6 mL 正己烷活化) ,用6 mL 正己烷淋洗,再用6 mL 水饱和的乙酸乙酯洗脱。收集洗脱液,用氮气吹干后加入3 mL 甲醇-乙酸乙酯(体积比为40∶60)溶解, 过氨基柱(氨基柱预先用6 mL 40∶60的甲醇-乙酸乙酯、6 mL水饱和的乙酸乙酯活化) , 收集流出液。溶液全流出后,再用3 mL 甲醇-乙酸乙酯(体积比为40∶60)洗脱,收集洗脱液并与流出液合并, 用氮气吹干, 加入甲醇溶解并定容至1 mL, 旋涡振荡 1 min, 用于UPLC-MS /MS测定。 Oasis HLB 柱、Sep-pakam ino-propyl柱(氨基柱) , Sep-pak silica 柱,6 mL, 500 m g,Waters公司
  D-1
2 蛋、奶中甲硝唑残留检测的高效液相色谱法研究
  研究了鸡蛋、牛奶中甲硝唑残留检测的高效液相色谱法。样品中甲硝唑用乙酸乙酯提取、浓
缩后用正己烷-乙酸乙酯(2∶1) 溶解,硅胶 SPE 柱净化,氮气吹干,流动相溶解,HPLC 测定。固定相为C18色谱柱,流动相为 pH 4.3 醋酸缓冲液∶乙腈(88 ∶12 ,V / V ) ,紫外检测波长325 nm。
样品制备：硅胶柱净化:固相萃取柱依次用甲醇、甲醇-乙酸乙酯、乙酸乙酯、正己烷-乙酸
乙酯各 6 mL 活化后,加入萃取得到的样品溶液,自然流出,用正己烷-乙酸乙酯 3 mL 淋洗,真空抽干后,加入甲醇-乙酸乙酯 3 mL 洗脱,收集洗脱液于10 mL 聚丙烯离心管中,45℃水浴氮气吹干,用流动相0.2 mL 溶解残渣,充分振荡后,取上清液进行 HPLC 分析 硅胶 柱 D-2
3 高效液相色谱法测定畜禽肉中四环素族抗生素的残留量
  研究了用 C18 固相萃取柱净化和高效液相色谱、二极管阵列检测器测定畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的检测方法，外标法定量。
样品制备：称取绞碎肉样10 g ,加入10 mL 乙腈和2 mL 1 mol/ L 草酸溶液,组织匀浆1 min ,4 500 r/min 离心10 min ,取出上清液于40 ℃水浴中氮气吹干,后加3 mL 蒸馏水溶解残渣,备用。用5 mL 甲醇、10 mL 蒸馏水先后淋洗C18固相萃取柱,再依次用10 mL 5 %EDTA - 2Na 溶
液、10 mL 蒸馏水淋洗C18柱,备用·将上述提取液全部过C18柱富集,流速015 mL/ min ,先用50 mL 蒸馏水淋洗柱,再用3 mL 洗脱溶液洗脱,流速 015 mL/ min ,流出液过0145μm 滤膜,滤液供液相色谱测定。 C18 柱
  D-3
4 牛奶中氯霉素残留的气相色谱测定法研究
  研究了牛奶中氯霉素残留的气相色谱法测定方法。用乙酸乙酯提取,蒸干, 4%氯化钠溶液溶解残渣,正己烷脱脂后过C18固相萃取柱净化,甲醇洗脱,硅烷化试剂50 ℃衍生30 min后测定。
样品制备：- 20℃冷冻后的牛奶样品在室温解冻,取10.0 mL置50 mL离心管中,加入20mL乙酸乙酯提取,中速震荡15 min,以6000 r/min离心10 min,将乙酸乙酯层移至鸡心瓶中。再加20
mL乙酸乙酯同法操作,合并乙酸乙酯提取液至鸡心瓶中,于45℃水浴中减压旋转蒸发至干,加10mL 4%氯化钠溶液于鸡心瓶中,溶解残留物,加5mL正己烷振荡混合1 min,静置分层,弃去正己烷。再加5 mL正己烷同法操作,取水层以每秒2滴的流速通过预处理后的C18柱,用5 mL 水洗柱,弃去洗液,抽干。用5 mL甲醇洗脱并收集洗脱液, 45℃氮气吹干备用 C-18 柱，3 mL  Waters公司
  D-4
5 气相色谱- 质谱法测定猪肉中的莱克多巴胺
  研究了用气相色谱- 质谱法测定猪肉中莱克多巴胺残留的方法。用乙腈提取试样中的莱克多巴胺,经SLH固相萃取柱净化,氮气吹干,衍生化后进行气相色谱- 质谱法测定。
样品制备：提取--称取绞碎的猪肉10. 0 g置50 mL离心管中,加10 mL乙腈,涡旋2 min, 7 000 r /min离心5 min,取上清液于分液漏斗中;加10 mL正己烷充分振摇,静置后分离乙腈相;残渣另取10 mL 乙腈重复提取一次,再用同一份正己烷分配,合并两次分离的乙腈相;加10 mL 饱和氯化钠溶液,充分振摇,静置后分离乙腈相,经无水硫酸钠过滤,用2mL乙腈洗涤无水硫酸钠,合并滤液于鸡心瓶中,旋转蒸干。
净化--用2 mL乙酸乙酯溶解鸡心瓶中的残渣,过SLH固相萃取柱(固相萃取柱预先用5 mL乙酸乙酯润洗) ;另取5 mL甲醇- 乙酸乙酯(3∶97,
V /V )洗涤鸡心瓶,过柱;用5 mL 甲醇- 乙酸乙酯(50∶50,V /V )洗脱,收集于5 mL具塞玻璃试管中,氮气吹干。
衍生和测定--残渣加0. 1 mL BSTFA,加盖后于漩涡混合器上涡旋1 min,在80 ℃的烘箱中衍
生1. 0 h,冷却后氮气吹干,加入0. 2 mL甲苯溶解,进行GC2MS分析
  硅胶(SLH，)500 mg，5 mL,
  D-5


文献
D-1 崔晓亮,邵 兵赵 榕 ,孟 娟,涂晓明,色谱，2006，24（3）：213～217
D-2 艾 霞，王大菊，华中农业大学学报，2006 ,25（3）266～269
D-3 金 雁, 姜 莉, 赵 颖, 林 颖，沈阳师范大学学报(自然科学版)，2006，24 （2）： 218～220
D-4 彭莉,程江,高岚等，中国兽药杂志，2006, 40 (9) : 14～17
D-5 应永飞，陆春波，任玉琴等，中国兽药杂志，2006, 40 (5) : 23～26　　　　

近年国内固相萃取-色谱分析的进展(24)

      这一讲座是有关近年国内固相萃取-色谱分析的进展的综述报告，它的浓缩性综述论文发表在《分析试验室》,2007,26(2):100-122上。本讲座是对这一综述的展开性报告的第25部分.——固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用(2)

3．固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用

国内近两年使用固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用论文见表 3-2

表 3-2  固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用(2)
序号 题目 摘要 使用SPE柱 文献
6 高效液相色谱法测定鱼肉中残留磺胺类药物
  研究了鱼肉中5 种磺胺类药物的高效液相色谱测定方法。样品经二氯甲烷提取,正己烷脱脂后经固相萃取柱净化等预处理。用Cloversil C18 色谱柱,流动相为乙酸+甲醇+水(1+10+89) 进行梯度洗脱,在紫外检测波长265 nm 处检测。
样品制备：消解渣用1 % (体积分数) 乙酸2甲醇(67+33) 1 mL 溶解,涡旋混匀,加正已烷3 mL ,涡旋混匀,静置分层, 弃上层正已烷层, 再加入正已烷3 mL ,涡旋混匀,转移下层至5 mL 离心管中,以3 000 r ·min - 1 离心2 min ,下层过0.45μm 有机系滤膜,直接进行固相萃取。下层加水稀至10 mL ,稀释液注入预先分别用3 mL甲醇和3 mL 水活化处理的Waters Oasis HLB 固相萃取柱,再用水1. 0 mL 和10 %(体积分数) 甲醇1. 0 mL 淋洗,弃去淋洗液,最后用甲醇5 mL洗脱,收集洗脱液。洗脱液35 ℃减压旋转蒸发至干,残渣用1 %(体积分数) 乙酸2甲醇(67 + 33) 1. 0 mL 定容,供液相色谱测定 Oasis HLB 柱，60 mg，3 mL
Waters 公司 D-6
7 固相萃取-高效液相色谱法同时测定猪肉中磺胺类和氟喹诺酮类兽药残留量
  研究了一种同时测定猪肉中3 种磺胺和7 种氟喹诺酮药物残留量的固相萃取-高效液相色谱法。样品经2 %醋酸P乙腈提取,正己烷脱脂,过ENVI-18 固相萃取柱净化。使用Shimadzu VP-ODS (250mm ×416mm , 5μm) 色谱柱,以甲醇- 0.02 mol/L 磷酸盐缓冲液-三乙胺系(体积比为25.5:74.5 ,pH2.80) 为流动相,采用二极管阵列检测器进行测定。
样品制备：准确称取已切碎的新鲜猪肉5.0g 于50mL塑料离心管中,放入冰箱中冷冻备用。临用时从冰箱中取出,室温下解冻。将已解冻的猪肉转移至匀浆杯中,加入一定量的混合标准溶液、8mL 提取液( 2 % 醋酸/乙腈) , 在暗处静置10min ,匀浆提取2min ,4000r/min 离心10min ,取出上清液。分别再用8mL 、4mL 提取液重复提取残渣两次,合并3 次提取液于50mL 塑料离心管中,4000r/min 离心10min。移取10mL 上清液于玻璃离心管中,于45 ±1 ℃水浴中用氮气吹至近3mL ,涡旋混匀。用正己烷萃取2～3 次脱脂,将下层于45 ±1 ℃水浴中用氮气吹至约018mL ,注入已预先用5mL 甲醇、5mL 水活化的 ENVI-18 固相萃取柱,减压抽干后,加入5mL 水淋洗,用6mL 4 %氨水P甲醇进行洗脱,洗脱液于45 ±1 ℃水浴中用氮气吹至约015mL ,用流动相定容至1mL ,过0122μm 滤膜后进样分析
  ENVI-18  柱500mg，3mL
  D-7
8 固相萃取- 离子色谱法测定乳与乳制品中可致癌物硝酸盐的研究
  研究了采用固相萃取- 离子色谱法测定乳与乳制品中可致癌物硝酸盐。将制备好的样品加入适量乙酸沉淀蛋白，离心，取上清液以4mL/min 的流速通过DIONEX OnGuard Ⅱ RP 固相萃取柱去除脂肪等疏水性化合物后，直接进样测定。用30mM 的KOH 溶液等度淋洗，流速为1.0mL/min，采用AS11-HC 型阴离子色谱柱进行分析
样品制备：先用5mL 甲醇溶液以4mL/min 的流速通过固相萃取柱，再用10mL 去离子水以4mL/min 的流速通过固相萃取柱，备用。
1）液体乳样品（如消毒牛乳、酸奶、含乳饮料等）：称取3.00g 样品于30mL 离心管中。
2）乳粉样品：称取1.00g 样品于30mL 离心管中，以少量50~55℃的去离子水溶解。
3 ）乳清粉及以乳清粉为原料生产的婴儿配方粉样品：称取1.00g 样品于50mL 锥形瓶中，用少量50~55℃的去离子水将样品混匀，用铝箔纸盖好锥形瓶口，将溶好的样品在沸水中煮15min，然后冷却至室温，转移至30mL 离心管中。
4）奶糖类样品：将样品用粉碎机粉碎，混合均匀，称取2.00g 样品于30mL 离心管中，加入少量50~55℃的去离子水，超声振荡20min。
5）向上述准备好的样品中加入0.5 mL 3% 乙酸溶液，以去离子水定容至30mL，混匀，放置5min 后，离心10min（7000 r/min），取上清液以4mL/min的速度通过备用的固相萃取柱，弃去前3mL 滤液。收集剩余样品滤液至样品瓶中，待测。 OnGuard ⅡRP,1mL
DIONEX D-8
9 固相萃取/气相色谱- 质谱同时测定猪肉中
4种β2激动剂类药物残留量
  研究了用气相色谱-质谱同时检测猪肉中克伦特罗、沙丁胺醇、特布它林和非诺特罗残留量的方法。样品经β-葡萄糖苷酸酶水解后, 用乙酸铵溶液提取, MCX固相萃取柱进一步净化, 再用N, O 双(三甲基硅基)三氟乙酰胺-三甲基氯硅烷(BSTFA + TMCS, 99 + 1)衍生化。采用选择离子监控模式( SIM)检测
样品制备：称取5 g绞碎的猪肉样品于离心管中, 加入50 μL β2葡萄糖苷酸酶, 涡动混匀。加入10 mL 20 mmol/L乙酸铵缓冲液, 涡动混匀, 37 ℃孵育10 h。12 000 r/min离心5 min, 将上清液转移至另一离心管中。MCX固相萃取柱依次用2 mL甲醇和2 mL水活化, 将上述上清液全部上样, 用2 mL水、0.1 mL 乙酸溶液、2 mL甲醇顺序淋洗, 5 mL三氯甲烷- 异丙醇- 氨水(体积比80 ∶20 ∶5)洗脱。收集洗脱液用氮气吹干, 向所得的残余物中加入100μL硅烷化试剂, 密闭后于70 ℃中衍生1 h, 氮气吹干后加
入1 mL甲苯定容, 供分析用。
  Oasis MCX,3 mL, 60 mg Waters 公司
  D-9
10 乳与乳制品中糠氨酸含量的测定方法
  糠氨酸(ε-N-2-呋喃甲基-L-赖氨酸)是牛奶在加热过程中美拉德反应的重要产物,美拉德反应的程度关系到生奶在加工过程中热处理的类型和强度, 即成品液态奶品质的优劣; 本方法用酸水解, 固相萃取糠氨酸, 反相离子对高效液相色谱紫外(280nm)检测器检测, 依据糠氨酸标准物质定量
样品制备：将C18 萃取柱安装在注射器上, 先后缓慢注入5mL 甲醇和10mL 水润湿萃取柱, 保持萃取柱湿润状态。吸收0.5mL 过滤液于萃取柱, 用注射器缓慢推入,丢弃排出的液体, 同时注意萃取柱内不要进气泡。吸取3.0mol/L 盐酸溶液3mL, 洗脱萃取柱中的样品, 收集无色的洗脱液准确至3mL, 该溶液即为上机的试样溶液。该溶液贮存在- 20℃冰箱可保持稳定
一星期。 Sep- Pak Vac C18 柱, 500mg,
Waters 公司 D-10



D-6 李孟玻,张德云，彭之见等，理化检验- 化学分册，2006 42（8）： 611～614
D-7 刘芃岩,姜宁,王洪宇,化学通报，2006，（8）：572～576
D-8 胡平，王淑惠， 王军等，现代科学仪器 2006，（2）：71～73
D-9 孔莹, 邱月明,李 鹏等，分析测试通报，2006，25（2）：63-66
D-10 许国庆, 赵慧芬, 李克杰,等，中国奶牛，2006，（7）：44～46 

近年国内固相萃取-色谱分析的进展(25)

      这一讲座是有关近年国内固相萃取-色谱分析的进展的综述报告，它的浓缩性综述论文发表在《分析试验室》,2007,26(2):100-122上。本讲座是对这一综述的展开性报告的第26部分.——固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用(3)

3．固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用

    国内近两年使用固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用论文见表 3-3

表 3-3  固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用(3)
序号 题目 摘要 使用SPE柱 文献
11 鳝鱼中己烯雌酚残留量HPLC测定的研究
  鳝鱼中己烯雌酚残留量的高效液相色谱测定方法. [方法]鳝鱼中的己烯雌酚残留量用乙醇萃取,过固相萃取柱( SPE) ,甲醇水(10 + 90) 2mL淋洗,甲醇2mL洗脱,收集洗脱液浓缩蒸干,再用甲醇溶解残渣,在280 nm检测波长处,用紫外检测器高效液相色谱仪检测,外标法定量
样品制备：称取5.00g均匀试样,置50mL离心管中. 加乙醇20mL,在涡流混匀器上剧烈混合成匀浆,超声萃取20 min. 置振荡器中振荡5 min,离心10min (4000 r /min). 用尖嘴吸液管将上清液转入至蒸发瓶. 残渣加乙醇20mL,在涡流混匀器上剧烈混合成匀浆,超声萃取20 min. 置振荡器中振荡5 min,离心10min (4000 r /min). 用尖嘴吸液管将上清液转入至蒸发瓶. 合并提取液水浴蒸发至约2mL. 取固相萃取柱( SPE) ,先用甲醇和水各2mL处理SPE小柱,再将浓缩液及少许乙醇清洗液上柱,用甲醇(10 + 90)淋洗液2mL淋洗,最后用甲醇2mL洗脱,收集甲醇洗脱液,浓缩蒸干,用甲醇1mL重新溶解,供高效液相色谱测定. 没有说明SPE的种类和规格
  D-11
12 使用安捷伦TC-C18 色谱柱分离测定10 种
头孢菌素类药物
  本文选取了10 种常用于医学和兽医临床,且比较有代表性的头孢菌素类抗生素, 对安捷伦 TC-C18 色谱柱的分离性能进行了测试
样品制备：取牛奶样品 20 mL, 加入 5 mL 含有0.2%甲酸的乙腈, 漩涡混匀。加入标准品稀释液, 浓度为 50 μg/kg 。5000 r/min
下离心 20 min 后, 取出上清液6.3mL 留待固相萃取。固相萃取柱使用 2 mL 甲醇润湿后用30 mmol/L NaH2PO4 和10 mmol/L Na2HPO4 缓冲溶液2 mL 冲洗, 再将匀浆上清液上样。用3 mL 水洗后抽干, 再使用1:1 的乙腈- 乙酸乙酯溶液3 mL 洗脱, 洗脱液用氮气吹干后再用1 mL 20% 甲醇水溶液超声溶解, 最后用0.45 μm 滤头过滤后, 取滤液留待色谱测定
  Accubond C-18 ODS,300 mg
Agilent 公司
  D-12
13 液相色谱/质谱法测定生鲜牛奶中的两种氨基甲酸酯农药残留
  使用高效液相色谱- 质谱法同时测定生鲜牛奶中杀线威、涕灭威残留量。样品用乙酸乙酯提取, C18固相萃取柱纯化、富集,采用电喷雾正离子模式离子化。在质谱图中, [M +Na ] +强度最大,定量测定
使用多离子监测模式m / z: 242→72, 213→116。杀线威、涕灭威的检测限分别为0.4 ng、0.1 ng,方法的平均回收率:杀线威为92. 5%～95.6%、涕灭威为91.6% ～93.4%
样品制备：量取5. 0 mL鲜牛奶于50 mL离心管中,分别加入5. 0 mL 水,调节pH 为6 ～7 之间。再加入20 mL 乙酸乙酯,超声提取10min,然后以4 000 r /min离心10 min,将有机相收集于圆底烧瓶中。加入10 mL乙酸乙酯于离心管内再进行一次萃取和离心(方法同上) ,合并有机相收集于圆底烧瓶中,再重复萃取一次。将收集到的有机溶液于40 ℃真空旋转浓缩至干。分别用2 mL丙酮洗涤圆底烧瓶3次,并依次通过1mL的已活化的C18小柱,收集流出液,并用氮气吹干,用流动相定容1 mL,准备进样 C18  柱 D-13
14 鱼肌肉中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留的高效液相色谱检测
  研究了同时检测鱼肌肉组织中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留的高效液相色谱方法。以水和丙酮为提取溶液,Oasis MCX 固相萃取柱为净化柱,采用Inertsil ODS-3 (5μm ,250 mm ×4.6 mm i. d. ) 反相色谱柱,以A 液(0.02 mol/ L 庚烷磺酸钠20. 025 mol/ L 磷酸钠溶液,二者体积比68∶32 ,p H3. 85) 与B 液(含1 mL/ L 三乙胺的甲醇溶液) 为流动相,梯度洗脱,紫外检测器225 nm处检测
样品制备：　从超市购买鲤鱼,去皮、去骨、匀浆处理后, 在- 20
℃保存备用。将鱼肌肉样品恢复至室温,称取5. 0g ,置50 mL 聚丙烯离心管中,加入混合标准工作液,静置15 min 后开始提取。依次加入2 mL 水、8mL 丙酮,涡动1 min ,3 000 r/ min 离心5 min ,将上
清液转入100 mL 离心管,重复提取1 次,合并2 次上清液。向上清液中加15 mL 二氯甲烷萃取,涡动1 min ,3 000 r/ min 离心5 min ,将上清液转移至另一50 mL 离心管中,加200μL 氨水,涡动混匀,加入20
mL 二氯甲烷再萃取1 次,涡动1 min ,3 000 r/ min离心5 min ,弃上清,合并2 次萃取液。将萃取液转移至60 mL 鸡心瓶中,加50 mL/ L 乙酸2 mL ,40 ℃水浴中减压浓缩至1. 5 mL 左右,过MCX 固相萃取
柱净化。
固相萃取柱依次用2 mL 甲醇、2 mL 去离子水活化平衡,将鸡心瓶中样品提取液过柱,自然重力下流出,50 mL/ L 乙酸2 mL 洗涤后用6 mL 乙腈2氨水(90 ∶10) 洗脱。洗脱液40 ℃氮气吹干。1 mL 复溶液复溶,过0. 2μm 有机微孔滤膜,取100μL 进样检测 Oasis MCX
混合阳离子交换固定相,60 mg,3 mL ,
Waters 公司 D-14
15 板鸭肌间磷脂的高效液相色谱分析
  研究了固相萃取净化和高效液相色谱法测定板鸭中几种肌间磷脂的方法。板鸭肌肉中的磷脂用氨丙基硅胶固相萃取柱纯化, 然后用高效液相色谱正相柱分离。通过紫外检测器和蒸发光散射检测器串联检测显示, 该测定方法回收率为8110%～9910% , 相对标准偏差为115%～213%。
样品制备：　磷脂分离：称取2010 mg脂质, 用110 mL氯仿溶解。先用1 mL氯仿活化小柱, 将015 mL脂质氯仿溶液移入氨丙基硅胶小柱中, 然后依次用2 mL氯仿异丙醇(体积比为2∶1) 和3 mL的2%乙酸乙醚(质量比) 洗脱小柱, 弃去洗脱液, 最后用310 mL甲醇溶液洗出磷脂并收集, 挥干溶剂, 用流动相C定容至013 mL, 以备HPLC测定
  BOND ELUT
LRC-NH2,100 mg
Varian 公司 D-15


文献
D-11 林红英,王伟强，沈子龙等，南京晓庄学院学报，2006，（4）：60～63
D-12 文大为，黄悯嘉，农业质量标准，2006，（3）： 35～37
D-13 陈燕清,谢石宇,颜流水等， 江西科学，2006，24（3）：242～245
D-14 郭 霞,张素霞,沈建忠等，中国兽医科学，2006 ,36 (9) :743～747
D-15 王道营 , 徐为民,徐幸莲等， 南京农业大学学报，2006, 29 (1) : 108～111

近年国内固相萃取-色谱分析的进展(26)

      这一讲座是有关近年国内固相萃取-色谱分析的进展的综述报告，它的浓缩性综述论文发表在《分析试验室》,2007,26(2):100-122上。本讲座是对这一综述的展开性报告的第27部分.——固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用(4)

3．固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用

    国内近两年使用固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用论文见表 3-4

表 3-4  固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用(4)
序号 题目 摘要 使用SPE柱 文献
16 固相萃取-高效液相色谱串联质谱法同时测定猪肉中克伦特罗和沙丁胺醇残留
  采用固相萃取2高效液相色谱串联质谱技术同时测定猪肉组织样品中克伦特罗和沙丁胺醇残留的确证方法。色谱柱: Inertsil C8-3  2.1 mm ×150 mm, 3.5 μm; 进样量: 30 μl; 柱温:30 ℃;流速: 0.3 ml/min;流动相A: 10 mmol/L的乙酸铵缓冲液, 以乙酸调节pH 至4.0; 流动相B:0.1%的甲酸甲醇/乙腈溶液( 1 ∶1) ;
样品制备：在50 ml带螺盖的离心管中精确称取约5 g (精确到0101 g) 均质样品,依次加入2 mol/L乙酸铵缓冲液15 ml (pH 5.2) 、β2葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶溶液40 μl, 充分振荡混匀,37 ℃下水解反应18 h。反应完毕后, 3 000 r /min离心10 min,取上清液过滤,收集滤液待净化。将固相萃取真空装置与真空泵连接好,装上MCX固相萃取小柱,依次以5 ml甲醇和0.1 mol/L的HCl 5 ml处理,取8 ml提取液以1滴/秒的速度过柱,然后依次以0.1 mol/L HCl 5 ml和5 ml甲醇淋洗柱子,抽真空5 min,最后用3 ml 4%的甲醇氨洗脱。洗脱液移入带螺盖的玻璃试管中, 40 ℃氮气吹干,残渣以1.0ml的10 mmol/L 乙酸铵(pH 4.0) /0.1%甲酸的甲醇/ 乙腈溶液( 1 ∶1)溶解,经0.45 μm滤膜过滤后即可上机测定。 Oasis MCX  柱Waters 公司 
  D-16
17 牛、猪肉中伊维菌素残留量的HPLC检测与分析
  研究了肉中伊维菌素残留量的柱前衍生HPLC 分析方法。牛、猪肉中的伊维菌素用乙腈提取后,经C18 固相萃取柱净化,蒸干净化液后,再用三氟乙酸酐和N- 甲基咪唑衍生,在高效液相色谱仪C18 柱上以100% 甲醇为流动相,在激发波长364nm,发射波长470 nm条件下,进行分离并经荧光检测。结果表明:伊维菌素浓度与峰面积在0.01～2.00μg/mL(0.05～10.00ng)范围内有很好的线性关系;检出限为2.656×10-5 mg/kg；0.04mg/kg水平的添加试验的平均回收率为100.5%,变异系数是1.3%;
样品制备：称取试样5.0g(准确至0.01g),加入40mL乙腈,高速匀浆2min,静置数分钟,倾出上层提取液,沉淀物用乙腈(20mL×2)重复提取2次,过滤并合并提取液,用旋转蒸发仪(40℃)将提取液浓缩蒸去乙腈,向残留物中加10mL去离子水,摇匀。将SPE(C18)柱依次用4mL 乙腈和4mL 水－乙腈溶液平衡,再使样品液通过C18柱(1mL/min),吹去柱内残留的液体,用5-10mL乙腈洗脱柱内吸附的伊维菌素,用旋转蒸发仪蒸发至干。向残留物中依次加入三氟乙酸酐-乙腈溶液150μ L和N-甲基咪-乙腈溶液100μL，轻轻摇匀后密闭，避光存放30 秒后，供高效液相色谱测定。 C18 柱,3mL
  D-17
18 使用安捷伦T C -C 18 色谱柱分离测定肉类产品中的14 种磺胺类药物
  使用安捷伦TC- C18 色谱柱, 可以对14 种磺胺类抗生素进行基线分离, 包括重新平衡在内的整个分析流程可以在34min 之内全部完成。该方法在分离度、峰形、保留时间与峰面积重现性上均可以满足兽药残留的分析要求。
样品制备：鸡肉样品使用含有5%甲醇和0.2%醋酸的水溶液匀浆后加入标准品稀释液,加样浓度为50 μg/kg。量取含1g 样品的匀浆液5 mL经过超速离心后, 取上清液2.5 mL 留待固相萃取。固相萃取柱使用
2 mL甲醇活化后用含5%甲醇和0.2%醋酸的水溶液1 mL 冲洗, 再将匀浆上清液上样。用3 mL 水洗后抽干, 再使用2:1的乙腈- 二氯甲烷溶液1.5 mL洗脱, 洗脱液氮气吹干后用0.5 mL 10%甲醇水溶液超声溶解, 过滤后进行测定 Accubond ODS 柱, 100 mg，
Agilent 公司 D-18
19 液相色谱-串联质谱法测定鸡肌肉组织中的四环素类药物残留
  研究了一种专属、灵敏的方法,用于同时检测鸡肌肉组织中土霉素、四环素和金霉素的残留。首先对鸡肌肉组织中的四环素类药物进行提取,再经C18固相萃取柱净化,采用电喷雾离子源,以正离子检测方式进行质谱分析。实验结果表明,在25～500μg /L这一质量浓度范围内上述3种四环素类药物均呈线性,其相关系数r > 0199。在低、中、高3个质量浓度添加水平, 3种四环素类药物的平均回收率为7214%～9419%,相对标准偏差小于11%。3种四环素类药物的检测限均可达到10μg / kg。
样品制备：　称取匀质(以10 000 r /m in 的速率匀浆1 m in )的鸡肌肉组织2 g于50 mL离心管中,加入MC I缓冲溶液[柠檬酸(含1个结晶水) 1219 g,磷酸氢二钠1019 g, 乙二胺四乙酸二钠3712 g, 加水至1 000mL,用饱和氢氧化钠调pH 至410, 所得溶液即为MC I缓冲液]10 mL,于旋涡混合器上混匀, 振荡30m in后以10 000 r /m in的速率离心10 m in,取5 mL上清液过C18固相萃取柱(依次用甲醇3 mL、水2mL 预活化) ,用水2 mL 淋洗,再用甲醇2 mL 洗脱,N2 吹干洗脱液。进样前用甲醇2水(体积比为7∶3)015 mL 溶解残余物,涡旋混匀,作为样品溶液。 C18 柱,100g /L
R-Biopharm  公司 D-19
20 鱼肉中甲砜霉素残留的分析方法研究
  利用固相萃取- 气相色谱- 质谱联机分析鱼肉中的甲砜霉素残留量。用乙酸乙酯振荡提取鱼肉中的甲砜霉素残留，用硅胶和C18 固相萃取柱对乙酸乙酯提取物进行净化和富集。净化后的提取物衍生化和气相色谱- 质谱选择离子定量检测(选择离子为409、411、499、501)。通过对提取净化富集条件的优化，建立了鱼肉中甲砜霉素的残留的检测方法。样品加标的回收率为80%～95%，相对标准偏差为3.6%～8.1%，最低检出限为0.3μg/kg。
样品制备：6ml 硅胶小柱依次用5ml 乙腈、5ml 体积比为50:50
的二氯甲烷和正己烷的混合液活化；500μl 二氯甲烷溶解上步中提取液残留物后上样；5ml 体积比为50:50 的二氯甲烷和正己烷的混合液淋洗，弃去淋洗液；用5ml 的乙腈水溶液洗脱，洗脱液用3ml 乙酸乙酯分3 次提取，合并提取液并吹干，用5ml 的乙腈水溶液溶解残留物，待C18 柱进一步净化。6ml C18 小柱依次用5ml 甲醇、5ml水活化，上样，5 m l 水淋洗，弃去淋洗液，5 m l 甲醇洗脱，吹干洗脱液。待衍生化
样品中甲砜霉素的提取
称取10.0g 左右经过匀浆的组织样品于50ml 聚乙烯塑料离心管中加入3g 无水硫酸钠，加入10ml 磷酸缓冲液(PBS, pH6)，混合均匀，再加入10ml 乙酸乙酯，振荡提取10min，5500r/min 离心10min，分出上清液。连续提取三次，合并提取液，在45 ～50 ℃水浴旋转蒸发
掉大部分溶剂，剩余溶剂用氮气吹至近干，用4ml 乙酸乙酯分两次将提取物转移至另一支试管中，同时弃去不溶物。再次将乙酸乙酯溶液蒸发至近干后，加入4ml 甲醇溶解提取物，加入4% 的N a C l 溶液，摇匀；再加入正己烷，萃取，弃去正己烷层；向水层中加入乙酸乙
酯，振荡，静置分层后，弃去水层；有机相氮气吹至近干待固相萃取柱进一步净化。
  C18  柱，500mg，6ml Supelco Park 公司；
硅胶柱，S-1500mg，美国Phenomenex 公司
  D-20



文献
D-16 吉彩霓,岳振峰,,欧阳姗, 中华预防医学杂志,2006,40(2): 123～125
D-17 周俊 乔坤云 冯婷等，现代科学仪器， 2006， （1）：
D-18 文大为,黄悯嘉, 农业质量标准,2006,(2): 30～32
D-19 刘艳华，张纯萍,门立强等，色谱，2006，24（2）：171～173
D-20 郝 凯，过世东，胥传来,食品科学, 2006, 27, (3): 169～172

近年国内固相萃取-色谱分析的进展(27)

      这一讲座是有关近年国内固相萃取-色谱分析的进展的综述报告，它的浓缩性综述论文发表在《分析试验室》,2007,26(2):100-122上。本讲座是对这一综述的展开性报告的第28部分.——固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用(5)

3．固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用

      国内近两年使用固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用论文见表 3-5

表 3-5  固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用(5)
序号 题目 摘要 使用SPE柱 文献
21 柱后衍生高效液相色谱法测定猪肉中的链霉素残留
  　猪肉样品经酸性氧化铝基质固相分散提取和C18固相萃取柱净化,链霉素残留液用甲醇从C18柱上洗脱,在氮吹仪上吹干,残渣用0. 01 mol/L 庚烷磺酸钠溶液溶解,用柱后衍生高效液相色谱法荧光检测,激发波长和发射波长分别为263、435 nm。该方法线性范围为10～200μg/kg,三个添加水平的回收率为77. 4% ～86. 5% ,测量结果的相对标准偏差为2. 00%～3. 53% ( n = 5) ,检出限为5μg/kg。
样品制备：称取2. 00 g猪肉样品于玻璃研钵中,加入4 g酸性氧化铝,用玻璃杵轻轻研磨2 min,使样品与填料混合均匀。取一层析柱,下端垫一片滤纸,装入无水硫酸钠约1 cm高,再装入样品,上端垫一片滤纸,
用20 mL正己烷- 叔丁基甲醚混合液(1 + 4)洗涤,真空抽干,用5 mL甲醇洗涤,再用20 mL磷酸溶液(pH = 2. 0)洗脱链霉素于50 mL烧杯中,加入3 mL庚烷磺酸钠溶液,混匀,过Oasis HLB C18固相萃取柱,弃去全部淋出液。用10 mL 甲醇洗脱到10 mL的离心管中,用氮气吹至近干。加入1. 00 mL流动相,溶液供液相色谱测定。
  Oasis HLB C18柱，60 mg,3 mL Waters公司
  D-21
22 SPE-HPLC 法测定鸡蛋中灭蝇胺—环丙氨嗪
  研究了用NH2 柱和97 %乙腈水溶液做流动相洗脱测定鸡蛋中灭蝇胺—环丙氨嗪残留量的高效液相色谱法,鸡蛋均质后经20 %氨水乙腈溶液重复提取2 次、浓缩、过C18固相萃取小柱净化等处理后上机检测,环丙氨嗪在0. 02～1. 0μg/ ml 浓度范围内呈线性相关,标准曲线的相关系数( r ) 为0. 9998 ,在0. 02 ,0. 05 ,0. 10 mg/ kg 添加浓度,回收率为84. 5 %～95. 2 % ,变异系数为3. 9 %～6. 8 %。检测限为0. 02 mg/ kg ,定量限低于0. 05 mg/ kg。
样品制备：将鸡蛋匀浆,称取匀浆物5. 0 g 于50 ml 聚丙烯具塞离心管中,加入氢氧化钠缓冲液0. 2 ml和20 %氨水乙腈提取液10 ml ,激烈震荡10 min ,然后中速振荡提取30 min ,10 000 g 离心10 min ,
析出提取液,重复提取1 次。合并提取液于45 ℃水浴旋转蒸干。用乙腈溶解,分3 次洗涤转移至试管中, 加5. 0 ml 正己烷, 震荡去脂和色素,2 000 g 离心10. 0 min ,弃去上层正己烷层。下层用氮气吹干后用1. 0 ml 乙腈溶解,溶解液注入预先用5. 0 ml 乙腈处理的AccuBONDⅡODS2C18固相萃取柱,再用5 ml 20 %氨水乙腈溶液洗脱,收集洗脱液,于45 ℃水浴氮气吹干,用流动相溶解残渣,准确定容至0. 5 ml ,过0. 22μm滤头后供液相色谱测定 AccuBONDⅡODS-C18 柱,500 mg，6 ml , Agilent ,公司
  D-22
23 固相萃取- 高效液相色谱法测定牛乳中氯霉素残留
  研究了牛乳中氯霉素残留测定方法。以非那西丁为内标,牛乳样品先采用10% 高氯酸溶液沉淀蛋白,再经strata - X固相小柱萃取,洗脱液浓缩后在ODS(416 ×150 mm)柱上,以乙腈- 5 mmol/L 磷酸氢二铵缓冲溶液(22∶78)为流动相, 277 nm检测。
样品制备：分别取氯霉素溶液110 ml 和内标溶液210 ml,置100 ml量瓶中,加空白牛乳稀释至刻度,摇匀,得对照溶液。精密量取内标溶液2 ml,置100 ml量瓶中,加待测牛乳稀释至刻度,摇匀,得供试溶液。分别精密量取对照溶液和供试溶液各溶液20 ml,离心管中,涡旋混匀。分别加入10% 高氯酸2 ml,涡旋3 min后3 500 r/min离心10 min。弃去脂肪层后,精密移取上清液10 ml,加在已用甲醇活化并用水冲洗过的固相萃取小柱上, 2 ml 40% 甲醇洗脱,再用2 ml甲醇洗脱,离心管收集甲醇洗脱液, 60℃氮气吹干。 strata-X 33μm Polymeric Sorbent柱，60 mg，3 ml，  phenomenex 公司
  D-23
24 固相萃取- 离子色谱法测定乳清粉中的硝酸盐
  研究了采用固相萃取- 离子色谱法测定乳清粉中的硝酸盐。用30mM 的KOH 溶液等度淋洗,流速为1.0mL/min,采用AS11-HC 型阴离子色谱柱进行分析。在此检测条件下,硝酸盐有很好的线性（r=0.9999）。该方法的最小检出限为500 μ g/kg,回收率为87.5％~105%，RSD<5%。
样品制备：称取1.00g 样品于50mL 锥形瓶中,用少量50~55℃的去离子水将样品混匀,用铝箔纸盖好锥形瓶口，将溶好的样品在沸水中煮15min，然后冷却至室温，转移至30mL 离心管中。向上述制备好的样品中加入1.0 mL 3% 乙酸溶液,以去离子水定容至30mL,混匀,放置5min 后,离心10min（7000 r/min）,取上清液以4mL/min的速度通过备用的固相萃取柱,弃去前3mL 滤液。收集剩余样品滤液至样品
瓶中,待测。
采用DIONEX OnGuard Ⅱ RP 固相萃取柱。它对疏水性化合物尤其是不饱合化合物和芳香化合物具有高的选择性,并且可在pH1~14 范围内保持稳定。由于柱填料中不含阴离子交换位点,因此不会对硝酸盐有所保留, 在很宽的pH 范围内均可获得很好的回收率。 DIONEX
OnGuard Ⅱ柱RP,1mL
  D-24
25 鸡蛋中7种磺胺药物的多残留检测方法
  　本研究探讨了用高效液相色谱法测定鸡蛋中7种磺胺药物(磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺间二甲氧嘧啶和磺胺喹恶啉)残留的方法,确定了从鸡蛋中提取、净化微量磺胺药物的条件。鸡蛋经二氯甲烷提取,用固相萃取柱净化处理后上机检测。结果显示, 7种磺胺药物标准曲线的相关系数( r)为0.999 5 ～0.999 9,在0.05 ～0.20 mg/kg浓度范围内,回收率达73.2% ～102.6% ,变异系数为1.8%～8.7% ,检测限为0.01～0.03 mg/kg。
样品制备：将鸡蛋匀浆,称取匀浆物210 g置于50 ml聚丙烯具塞离心管中,加入柠檬酸钠缓冲液014 ml和二氯甲烷10.0 ml,激烈震荡10 min,然后中速振荡提取30 min,离心10 min (10 000 g,用移液管吸取下层液体5.0 ml于离心管中, 35 ℃水浴氮气吹干。用1.0 ml流动相A 溶解残渣,涡旋混匀,加3.0 ml正已烷,震荡去脂和色素,离心10 min ( 2 000 g,弃去上层正已烷层,再重复去脂1次。下层加水稀释至
510 ml,稀释液注入预先分别用5.0 ml甲醇和510 ml水处理的AccuBOND Ⅱ ODS-C18 固相萃取柱, 经5.0 ml水和5.0 ml 5%的甲醇溶液淋洗后用5.0 ml甲醇洗脱,收集洗脱液,于35 ℃水浴中氮气吹干,准确加入0.5 ml流动相A溶解残渣,过0.22μm滤头后供液相色谱测定。 AccuBONDⅡ ODS-C18 柱，500 mg ，6 ml  Agilent 公司
  D-25




D-21 罗瑞峰,马小宁,化学分析计量,2006,15(3): 22～24
D-22 王　冉,刘铁铮,柳伟荣，浙江农业学报，2005，17 (6) :376～379 
D-23 李 博,陈 磊,朱韵韵等，中国卫生检验杂志，2005，15（12）：1426～1428
D-24 胡 平1 王淑惠1 王 军，现代科学仪器, 2005,(6):82～84
D-25 刘铁铮, 王冉, 　柳伟荣等，江苏农业学报, 2005,21(4) : 306～311

近年国内固相萃取-色谱分析的进展(28)

        这一讲座是有关近年国内固相萃取-色谱分析的进展的综述报告，它的浓缩性综述论文发表在《分析试验室》,2007,26(2):100-122上。本讲座是对这一综述的展开性报告的第29部分.——固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用(6)

3．固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用
   
国内近两年使用固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用论文见表 3-6

表 3-6  固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用(6)
序号 题目 摘要 使用SPE柱 文献
26 牛奶中残留的盐酸克伦特罗GC/MS 测定
  研究了牛奶中残留的盐酸克伦特罗的确证检测方法。残留的盐酸克伦
特罗用乙腈、无水硫酸钠提取，提取液旋转蒸发干后，用pH5.2的乙酸胺缓冲液溶解。萃取的样液用C18和SCX小柱固相萃取净化，分离的残留药物经过双三甲基三氟乙酰胺 BSTFA 衍生后用带有质量选择检测器的气相色谱$质谱联用仪测定。该方法在0.005～0.2 μg/mL内线性关系良好. C18 SCX 柱 D-26
27 提高畜禽肉中金霉素残留量检测
灵敏度的高效液相色谱测定法
  利用高效液相色谱法测定畜禽肉中金霉素的含量,通过对提取液、净化条件和检测条件的筛选,提高了检测灵敏度,最小检测浓度达到0. 03mg/kg。
样品制备：提取:称取肉样10. 0g,置于50mL 离心管中, 加20mL Mcllvaine - Na2 EDTA 液, 匀浆2min。离心10min,移出清液,在残渣中再加入20mL Mcllvaine - Na2 EDTA溶液,重复上述操作,合并上清液,再次离心10min后净化。
净化:将固相萃取小柱安装在固相萃取装置上,分别用3mL 甲醇、2mL 蒸馏水进行活化后,将样品提取液倒入Oasis固相萃取柱中,待上清液完全流出后,用3mL 5%甲醇水溶液洗去杂质,弃去全部流出液,最后用5mL甲醇进行洗脱,收集洗脱液。
浓缩:在不超过50℃下,用氮吹仪浓缩至0. 5mL,过0. 45μm微孔滤膜后为待测液。 Oasis HLB 柱
200mg, 6mL
Waters 公司 D-27
28 液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法测定鸡肉中17 种磺胺类药物的残留
  研究了鸡肉中17 种磺胺类药物残留量的液相色谱2电喷雾串联四极杆质谱测定方法。以稳定同位素13C6-磺胺二甲基嘧啶作为内标,采用多反应监测定量。样品经过匀浆、乙腈提取、正己烷脱脂、硅胶柱净化后进行液相色谱2质谱分析。采用Capcell Pak C8DD 色谱柱,以均含0. 2 %甲酸的水和甲醇为流动相进行梯度洗脱。方法检出限为0.02～1μg/ kg ,17 种磺胺类药物的加标回收率为52.3 %～124.19 %(添加水平为1 , 5 , 10μg/ kg) ,相对标准偏差为1.0 %～17.6 %。 Sep-Pak-Silica 柱，500 mg ,3 mL，Waters 公司
  D-28
29 液相色谱-电喷雾串联质谱法测定鱼肉中氯霉素含量
  建立了液相色谱2电喷雾串联质谱法测定鱼肉中氯霉素残留的检测方法。氘代氯霉素(d52CAP) 为内标,样品经乙酸乙酯提取,30 %甲醇2正己烷去脂,固相萃取柱净化,乙腈2水(1 + 1) 为流动相,C18 色谱柱进行分离,负离子模式检测,氯霉素m/ z 321/ 152 ,321/ 194 ,321/ 257 ,氘代氯霉素325. 5/ 156. 5 为监控离子对,以m/ z 321/ 152 ,325. 5/ 156. 5 峰面积作内标法定量。方法的回收率在92. 8 %～108 % ,相对标准偏差为1. 9 %～9. 3 % ,检出限低于0. 01μg ·kg - 1 。 Oasis HLB 柱，3 mL , 60 mg
Waters 公司 D-29
30 柱前衍生- 固相萃取- 高效液相色谱法测定黄油中七种生物胺
  研究柱前衍生- 固相萃取- 反相高效液相色谱法测定黄油中7种生物胺(色胺、酪胺、组胺、腐胺、尸胺、精脒、精胺)残留的方法。黄油样品经甲醇提取去除蛋白和脂肪，提取液经柱前衍生，衍生后通过ODS- C18固相萃取柱净化、富集，Inertsil ODS- 3色谱柱分离，荧光检测器检测，外标法定量，流动相为乙腈和水梯度洗脱20min，流速为1mL/min。对添加3个不同含量水平的7种生物胺，5次平行实验的变异系数(CV)为3.52%~6.75%，检测低限为2.71×10- 5~1.36×10- 3μg/mL，平均回收率为80.4%~89.1%。
  ODS- C18 柱
500mg，3mL：Agilent公司；
  D-30



文献
D-26 岳秀英,程江，彭莉等，四川动物与兽医科学，2005，（12）：25～26
D-27 李伟红, 戴廷灿, 曾艳兵等，江西农业学报，2005, 17 (4) : 56～59
D-28 董 丹，邵 兵 ，吴永宁等，色谱，2005，23（4）：404～407
D-29 瞿进文, 吴洁珊, 蔡勤仁等，理化检验- 化学分册， 2005，41（11）：799～781
D-30 董伟峰，林维宣，赵彤彤等，食品科技，2005（8）：74～77

近年国内固相萃取-色谱分析的进展(29)

      这一讲座是有关近年国内固相萃取-色谱分析的进展的综述报告，它的浓缩性综述论文发表在《分析试验室》, 2007,26(2):100-122上。本讲座是对这一综述的展开性报告的第30部分.——固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用(7)

3．固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用
国内近两年使用固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用论文见表 3-7

表 3-7 固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用(7)
序号 题目 摘要 使用SPE柱 文献
31 RP-HPLC 法测定猪肝中盐酸克伦特罗的残留量
  本文采用液相萃取法和固相萃取法提取猪肝中的盐酸克伦特罗(Clenbuterol Hydrochloride) ,并用210nm 单波长检测的RP2HPLC 法测定盐酸克伦特罗的含量
  C-18 柱,2mL
  D-31
32 高效液相色谱法测定肉类中克伦特罗等激素类生长促进剂残留量
  肉类样品用乙醇提取,经C18 固相萃取柱,甲醇(10 + 90) 2 mL 淋洗,甲醇2 mL 洗脱。采用Hypersil C18 色谱柱(250 mm ×4. 6 mm ,5 μm) ,甲醇2磷酸(1 + 99) 为流动相(75 ∶25) ,流速1 mL ·min - 1 ,柱温26 ℃,紫外检测波长240 nm 测定。克伦特罗、多巴胺、己烯雌酚、睾丸素、黄体酮五种激素类生长促进剂成分可同时测定,检出限分别为0. 4 ,2. 4 ,0. 3 ,0. 5 ,0. 4μg ·g - 1 ,平均回收率分别为99. 0 % ,98. 0 %,100. 7 % ,97. 5 % ,94. 0 % ,RSD 分别为2. 7 % ,1. 2 % ,2. 3 % ,2. 3 % ,315 %。 C18 柱，1 mL， 100 mg
  D-32
33 高效液相色谱法检测草鱼可食用组织中甲硝唑的残留
  建立了草鱼的肌肉、皮肤组织中甲硝唑残留检测的高效液相色谱法(HPLC) ,样品中甲硝唑选用乙腈提取、Silica (SiO2) 固相萃取柱净化、氮气吹干浓缩、紫外检测(波长325 nm) 、HPLC 测定。该方法可检出鱼肉、鱼皮组织中甲硝唑的最低定量限为1μg/ kg。在空白样品中添加浓度为1μg/ kg 时,鱼肉、鱼皮中甲硝唑的平均回收率分别为69 %和75 % ,日间变异系数均小于15 %。 硅胶柱， 200 g/3 L
  D-33
34 高效液相色谱法同时测定禽肉中的克伦特罗和沙丁胺醇
  　建立高效液相色谱法同时测定禽肉中克伦特罗和沙丁胺醇两种β2兴奋剂残留量的方法。用乙腈提取禽肉样品,过C18固相萃取柱净化,采用高效液相色谱分离,二极管阵列检测器检测,外标法定量。
  C18-E  柱，美国Phenomenex 公司
  D-34
35 高效液相色谱法同时测定禽肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留的研究
  建立了一种高效液相色谱法同时测定禽肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留的分析方法。禽肉样品用0. 1 mol / L Na2EDTA - Mcllvaine 缓冲溶液提取, 清液用Oasis HLB 固相萃取柱和Carboxylic acid 阴离子交换柱净化, 用流动相洗脱定容后, 用紫外检测器于350 nm测定。在5～100μg/ kg 添加水平, 回收率为60 %～100 % , 相对标准偏差在16 %以内。土霉素、四环素的检出限为2μg/ kg , 金霉素、强力霉素的检出限为5μg/ kg。 Oasis HLB 柱
500 mg , 6 mL , Waters 公司
  D-35



文献
D-31 孙 蕾,刘桂琴吕宪禹,现代仪器, 2006, (6):14～16
D-32 刘 军, 刘 清, 李志强等，理化检验- 化学分册，2005 ，41（7）： 504～506
D-33 艾 霞  ,王大菊,张丛兰等，天津农学院学报，2005，12（2）： 10～14
D-34 金 雁,姚家彪,姜 莉等，现代仪器。2005,(5):34～36
D-35 庞国芳, 曹彦忠, 张进杰等，析测试学报，2005，24（4）：61～64

近年国内固相萃取-色谱分析的进展(30)

      这一讲座是有关近年国内固相萃取-色谱分析的进展的综述报告，它的浓缩性综述论文发表在《分析试验室》,2007,26(2):100-122上。本讲座是对这一综述的展开性报告的第31部分.——固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用(8)

3．固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用
国内近两年使用固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用论文见表 3-8

  表 3-8 固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用(8)
序号 题目 摘要 使用SPE柱 文献
36 固相萃取辅助提取- 气相色谱- 质谱分析烟熏
腊牛、羊肉挥发性成分
  用氮气冲洗、Sep2PakC18固相萃取柱吸附和冷有机溶剂捕集提取烟熏腊牛、羊肉的挥发性成分,用色谱- 质谱联用法测定结构,用气相色谱( F ID检测器)法进行定量分析。共鉴定出42个化合物,其中17个挥发物是在烟熏腊肉中新鉴定的化合物,这些化合物是: 2-乙基苯胺、7, 7-二甲基二环[ 3.3.0 ]辛烷-2-酮、2-苯基-1-二甲基亚甲基环丙烷、4, 5, 6, 7, 8, 9-六氢环辛间四烯并呋喃-1 (3H) -酮、2-甲基-6-对甲苯基-2-庚烯、法呢醇、十二酸、3-(1,5-2二甲基-4-己烯基) -6-亚甲基-1-环己烯、1, 2-环氧十六烷、月桂酸酐、2, 6-二叔丁基-4-(N, N 2二甲氨甲基)酚、2-苯并噻唑啉酮、亚油酸乙酯、亚油酸、乙酸十八醇酯、2, 2′- 亚甲基双( 6-叔丁基-4-甲基)苯酚和3, 12-齐墩果烷二酮。
  Sep-Pak C18  柱， Waters 公司 D-36
37 气相色谱-质谱同时测定猪肉中3种巴比妥药物残留
  　建立了固相萃取2气相色谱2质谱同时分析猪肉中3种巴比妥类药物残留量的方法。对猪肉样品的乙腈提取、C18固相萃取柱净化和碘甲烷甲基化条件进行了优化。采用HP25毛细管柱分离,电子轰击电离源
质谱选择离子模式( SIM)检测(巴比妥m / z 126, 169, 183, 184;异戊巴比妥m / z 169、170、184、226;苯巴比妥m / z 175、232、245、260; dwell time 80 s) ,外标法定量(定量离子m / z分别为169、169和232) 。3种巴比妥药物的添加标准曲线线性回归系数均在0. 99以上;线性范围2. 5～50μg/kg,回收率为65% ～112% ,相对标准偏差514% ～17. 2% ,检出限均为1μg/kg。
  C18 柱 D-37
38 气相色谱/质谱法测定猪肉中4种苯二氮类镇静剂残留
  　建立了同时测定猪肉中4种苯二氮卓类药物(地西泮、艾司唑仑、阿普唑仑、三唑仑)残留量的固相萃取-气相色谱2质谱方法。用乙腈提取药物, C18固相萃取柱净化, gc /MS分析。运用HP25毛细管柱(30 m ×0. 25 mm ×0. 25μm)进行分离,电子轰击电离源( EI)质谱选择离子模式( SIM)检测(地西泮m / z 241、256、257、284;艾司唑仑m / z 205、239、259、294;阿普唑仑m / z 204、273、279、308;三唑仑m / z 238、313、315、342) ,外标法定量(定量离子m / z分别为256、259、270和313) 。4种苯二氮类药物的标准曲线线性回归系数均在0. 99以上,地西泮线性范围超过5～100μg/L;回收率为60% ～70%;相对标准偏差7. 6% ～12. 9% ,最低检出限为2μg/kg。艾司唑仑、阿普唑仑、三唑仑3种药物的线性范围超过50 ～1000 μg/L;回收率为60% ～115%;相对标准偏差3. 8%～19. 7% , 检出限为10μg/kg。
  C18 柱, 3 mL, 500 mg，Supelco公司
  D-38
39 高效液相色谱/串联质谱法同时测定虾中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素残留量
  用高效液相色谱/串联质谱(LC/MS/MS)同时测定虾中的氯霉素(CAP) 、甲砜霉素( TAP)和氟甲砜霉素(FF)。均质后的虾样品,采用碱化乙酸乙酯提取。浓缩提取物经液2液分配(LLP)去除脂肪, C18固相萃取(SPE)柱净化后,采用LC/MS/MS电喷雾电离(ESI) ,负离子,多反应监测(MRM)模式检测,外标法定量。检出限为:氯霉素和氟甲砜霉素0. 01 ng/g;甲砜霉素为0. 05 ng/g。在添加浓度0. 1～2. 0 ng/g范围内,氯霉素回收率为73. 9%～96. 0%;甲砜霉素回收率为78. 6%～99. 5%;氟甲砜霉素回收率为74. 9% ～103. 7%;相对标准偏差(RSD)均小于6. 4%。
  Supelclean LC-18, 3 mL, 500 mg， Supelco 公司
  D-39
40 高效液相色谱法检测鳗鱼中氟苯尼考残留量
  建立了鳗鱼肌肉中氟苯尼考残留的分析方法。采用乙酸乙酯作为提取
剂,提取液挥干后溶于缓冲液中,经正已烷脱脂、C18 SPE 小柱净化后,采用高效液相色谱进行分析,方法在1～200 ng 之间呈线性相关,相关系数r = 0. 9999。对于0. 05 、0. 10 、0. 50 mg/ kg 3 个添加水平,平均回收率均在90 %以上,相对标准偏差为4. 24 %～7. 36 % ,方法检出限和定量限分别为911μg/ kg 和22. 3μg/ kg。 C18  柱
  D-40


文献
D-36 余爱农,代 红,陈根洪, 精细化工, 2005,22(10): 777～780
D-37 赵海香,邱月明，汪丽萍等，分析化学，2005，33（6）：777～780
D-38 汪丽萍，李 翔，孙英等，分析化学，2005，33（7）：951～954
D-39 彭 涛,李淑娟,,储晓刚等，分析化学，2005，33（4）：463～466
D-40 杨 方，余孔捷, 黄建生，分析试验室，2005，24（2）： 44～46

近年国内固相萃取-色谱分析的进展(31)

        这一讲座是有关近年国内固相萃取-色谱分析的进展的综述报告，它的浓缩性综述论文发表在《分析试验室》,2007,26(2):100-122上。本讲座是对这一综述的展开性报告的第32部分.——固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用(9)

3．固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用

国内近两年使用固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用论文见表 3-9

表 3-9 固相萃取-色谱分析在奶制品和肉类食品分析中的应用(9)
序号 题目 摘要 使用SPE柱 文献
41 高效液相色谱法同时测定鳗鱼及其制品中八种磺胺类药物
  建立了高效液相色谱测定鳗鱼及其制品中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲氧嗪、磺胺甲噁唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉等八种磺胺类药物残留量的方法。研究了鳗鱼及其制品中八种磺胺类药物残留的提取、净化和高效液相色谱条件。样品经二氯甲烷提取、MCX 阳离子固相萃取小柱净化，以Cloversil C18 柱，甲醇、1% 乙酸(V/V)梯度洗脱分离，紫外检测器检测、外标法定量。结果表明，样品添加0.1mg/kg 的回收率为80%～93%，定量测定低限为0.02mg/kg。方法已应用于实际样品的测定。
  Oasis MCX®(阳离子交换柱)
60mg，3mL, Waters 公司
  D-41
42 固相萃取- 高效液相色谱法同时
测定牛奶中的多种四环素残留
  ：建立牛奶中四环素族抗生素残留的高效液相色谱法。方法：样品5g 经20ml EDTA-Mcllvain 缓冲液提取，离心后取5ml 上清液于预平衡的Sep-Pak WatersTM Sep-Pak® C18 固相萃取柱净化，用10mmol/L 的草酸甲醇溶液洗脱，并于40℃用N2 浓缩仪吹干，流动相0.5ml 溶解残渣进行HPLC 分析。结果：标准校准曲线在0.05～1.0mg/L 的范围内，相关系数r ＞ 0.99。牛奶中土霉素、四环素一金霉素和强力霉素的定量检测限(LOQ)依次是0.025、0.025、0.05、和0.05mg/L；添加水平分别为0.1、0.1、0.2 和0.2mg/L 时，样品加标回收率为84%～110%，RSD ＜ 10%
  Sep-Pak  C18  柱,3ml,
Waters 公司 D-42
43 固相萃取- 高效液相色谱荧光检测法测定染色虾米中的碱性玫瑰精含量
  建立高效液相色谱- 荧光检测法测定染色虾米中的碱性玫瑰精含量的检测方法。方法:样品经均质,无水乙醇- 氨水- 水(7 + 2 + 1) 溶液浸提,SPE - HLB 柱固相萃取,用Luna ODS C18分离柱,甲醇+ 0.4 g/ L 十六烷基溴化铵的水溶液(70 + 30) 为流动相, 荧光检测波长: Ex 为554 nm , Em 为570 nm。结果: 玫瑰精线性范围为0.05 ～10.00μg/ mL , r2 = 0.999 ,平均回收率为85.92 % ,RSD = 4.63 %( n = 6) ,最低检出限为2μg/ kg
试验了C- 18柱、中性氧化铝柱、酸性氧化铝柱和碱性氧化铝柱规格均为500 mg/ 3ml ,均购自河北津扬滤器厂
  HLB 柱:60 mg/ 3ml, Waters 公司
  D-43
44 固相萃取高效液相色谱法测定乳粉中苯并咪唑类药物残留
  研究了乳粉中丙硫咪唑、噻苯咪唑、苯硫咪唑、噻苯咪唑酯、苯亚砜苯咪唑等五种苯并咪唑类药物液相色谱测定方法。乳粉中苯并咪唑类药物残留经碱性乙酸乙酯提取,Waters Oasis HLB 固相萃取柱净化,以Cloversil C18柱为固定相,甲醇和0. 02 mol/ L KH2PO4 为流动相,紫外检测器下测定。该法检出限为01020 mg/ kg ,添加标准0. 10 mg/ kg 的回收率为71 %～90 %。
  Oasis HLB 柱,Waters 公司 D-44
45 金华火腿加工过程中肌肉肌内脂的水解变化研究
  　研究了金华火腿股二头肌(biceps femoris) 肌内脂肪在加工过程中不同时期的水解变化情况。肌内脂使用氯仿2甲醇溶液提取,采用固相萃取法将中性脂(主要为甘油脂) 、游离脂肪酸和磷脂分离,用毛细管气相色谱分别分析甘油脂、游离脂肪酸和磷脂脂肪酸的种类与比例。通过比较不同时期样品的色谱结果,发现在金华火腿原料中磷脂脂肪酸的不饱和脂肪酸百分含量较高,尤其是多不饱和脂肪酸的含量高达49122 %。且在金华火腿成熟过程中,磷脂水解作用显著,而甘油脂脂肪酸百分比例比较稳定,说明甘油脂水解作用相对较弱 AccuBOND Ⅱ
AMINO 柱
Agilent 公司 D-45


文献
D-41 林海丹，谢守新，吴映璇，食品科学，2005，26（1）： 176～178 
D-42 秦 燕，陈毓芳，林 峰等，食品科学，2005，26（3）：202 ～204
D-43 黄百芬,铁晓威,钱 欣等，中国卫生检验杂志，2005，15（1）： 17～19
D-44 林海丹，谢守新, 吴映璇，分析试验室，2005，24（1）：27～29
D-45 佘兴军,童群义,食品与发酵工业, 2005 ,31 (1): 39～42