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主题：【每日10分】正相色谱和反相色谱的区别？

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huaibeijiayuan

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发表于：2009/12/19 11:33:07 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

悬赏金额：10积分状态：已解决

活动规则：每天不定时、不定范围出个和仪器或者采购有关的问题，发布悬赏十分。谁先正面回答的，得十分。后来的板油你们就只好呐喊助威了，注意，首先要抢先，其次要正面回答，不能尽说废话空话套话啊。如果斑竹认为你回答得太简单了，有可能把十分拆成三分之一给你哦。
今日话题：

正相色谱和反相色谱的区别？如何切换呢？

推荐答案：可爱宝贝回复于2009/12/21

正相色谱用的固定相通常为硅胶，以及其他具有极性官能团，如胺基团和氰基团的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基或其他团的极性较强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正乙烷、氯仿、二氯甲烷等。
反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有C18、C8、C4、C6H5等。

反相色谱切换正相色谱流程：
1、先将色谱柱用相应的溶剂冲洗干净，然后将色谱柱拆下来密封保存。用双通将进样器与检测器连接。
2、将贮液瓶内装入300ml的二次蒸馏水，将流速渐次提高到2.0ml/min冲洗系统1.5h。注意观察泵压。
3、将流速渐次降到0ml/min，把二次蒸馏水更换为甲醇，，将流速渐次提高到2.0ml/min冲洗系统1h。
4、用同样的方法将甲醇更换为异丙醇、四氢呋喃，各冲系统1h。
5、最后将四氢呋喃更换为预先配制好的流动相冲系统1h，同时将柱塞杆清洗系统内的10%异丙醇更换为流动相，保持50-60滴/min的速度清洗柱塞杆。再将双通更换为正相色谱柱，待色谱柱平衡好以后就可分析样品了。

该帖子作者被版主 土老冒豆豆加 10积分， 2经验，加分理由：活动基金

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2009/12/19 12:12:06 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

这个问题太简单了，从原理上说，他们就是固定相的极性和流动相的极性哪个大的问题了。

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huaibeijiayuan

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2009/12/19 12:58:53 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 土老冒豆豆(土老冒豆豆) 发表:
这个问题太简单了，从原理上说，他们就是固定相的极性和流动相的极性哪个大的问题了。

huaibeijiayuan：土豆认为简单，就增加了一个题目。
土豆：晕倒，还有附加题的啊，这个切换是说从正相切换到反相还是什么意思啊？

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2009/12/19 14:49:35 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。以下是详细说明：
1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。
2、反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。

该帖子作者被版主 huaibeijiayuan加 3积分， 2经验，加分理由：回答比较详细，忘了回答第二个问题

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andychan59

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2009/12/19 19:40:36 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

正相色谱法　采用极性固定相(如聚乙二醇、氨基与腈基键合相)；流动相为相对非极性的疏水性溶剂(烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物(如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。
反相色谱法　一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物。RPC在现代液相色谱中应用最为广泛，据统计，它占整个HPLC应用的80%左右。
正相色谱法与反相色谱法比较表
正相色谱法反相色谱法
固定相极性高～中中～低
流动相极性低～中中～高
组分洗脱次序极性小先洗出极性大先洗出

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