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液相色谱（LC）

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主题：【讨论】说说标准储备液的配制！

浏览0 回复8 电梯直达

penglin1984

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发表于：2010/02/26 16:05:54 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

记得之前在论坛里跟朋友们说过相关方面的问题，今天把问题重新讨论一遍，旨在把它搞透彻哈！
下面我说说情况：我和本实验室的一个同学用相同的仪器，同一根柱子，相同的标准品，以及相同配比的流动相。同一浓度的标准品跑出来的峰形差别很大。她的峰形对称，拖尾因子很小，在规定范围内。而我跑的峰形分叉，而且峰形比较胖。我查看了一些资料，上面有讲标准品溶解稀释定容时要用流动相，而不能用比流动相强的溶剂来稀释定容标准品。有朋友说，资料上这样讲的根据在于溶剂效应。但是本人也参考了其他一些文献上的方法，也有用纯溶剂稀释定容而不用流动相的呢？大家怎么看这个问题！

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2010/2/26 16:34:09 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

样品溶液的溶剂强度强于流动相溶剂强度时可能会造成的峰展宽、峰分叉现象
　　
现象
　　色谱图上较早洗脱的峰扭曲变形或者开叉，与此同时较晚洗脱的峰则较为尖锐与对称，这些现象显示一个比较特殊的起因――样品溶液的溶剂很可能强于流动相。例如样品溶液的溶剂是100％乙腈（100％的强溶剂），而流动相的组成则较弱，18％的乙腈与72％的水。第一个峰是开叉的，并且与第二个峰相比，明显地变宽了。当样品溶液的溶剂变成流动相时，所有的峰形都改善了，且变得尖锐。
　　
解释
　　当样品进样时,有可能出现峰展宽,最佳的样品溶液组成和体积将会保持在10%甚至更低,在这个例子里,当样品溶剂与流动相溶剂强度不同时,换句话来说,也就是样品未用流动相溶解,因此,有些样品分子溶解在强溶剂(100%ACE),并随强溶剂流过柱子,而有些则溶解在流动相中,从而导致峰分叉。
　　当样品与流动相强度相差较小,进样影响也会小,第一个峰可能会宽于第二个峰,而当这种展宽导致必要的分离度降低时,这样情况应引起注意,例如使用一根短柱,和5UL进样,这与最佳进样体积4UL相近,用了极性更强的溶剂导致分离度明显的降低。
　　
避免的方法
　　尽量用流动相来溶解样品，对于梯度洗脱，采用初始的流动相比例。对于在流动相中溶解度小，必须用强溶剂的时候，减少进样体积以消除溶剂效应的影响。

该帖子作者被版主 hgycook加 2积分， 2经验，加分理由：详细

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2010/2/26 17:25:33 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

上边网友讲得正确，补充一点。当所设流动相（或梯度洗脱时的初始流动相）中有机溶剂含量较低时，溶剂效应会比较明显，例如10%甲醇。这种情况下不能用高浓度甲醇配样液。而当流动相中有机溶剂含量较高（例如甲醇含量高于50%）时，溶剂效应不明显，此时尽管用100%甲醇配制样液，只要进样体积不是很大（不超过10微升），不会产生明显的峰形改变。

该帖子作者被版主 hgycook加 1积分， 2经验，加分理由：感谢补充

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有水有渝

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2010/2/26 19:44:13 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

你最好稀释的方法与你同学的不一样吗？溶剂效应要有机相比例相差20%以内应该都没有明显的影响，例如我常用30%甲醇为流动相，而溶剂用50%甲醇，结果并没有太大影响。

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penglin1984

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2010/2/26 20:28:09 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

感谢朋友们的指导与帮助。我的药物用100%乙腈溶解并定容，所设定的流动相比例为乙腈：水=18：82。用150mm短柱子，0.8mL/min分析的时候，峰形分叉，而且峰很宽。调整了流动相比例20：80，25：75，30：70，保留时间有所改变，但峰形还是分叉。后来换上了250mm的长柱子，流动相比例设为30：70，流速设为0.6mL/min的时候，目标峰峰形很好，不分叉，且拖尾因子很小。不知道在这种情况下，溶剂效应是否有影响？

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tiantan456

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2010/2/26 21:11:29 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

长柱对样品的缓冲能力大于短柱，所以比起来，影响稍小点罢了，但溶剂效始终还是存在的。

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tyys98

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2010/2/26 22:14:23 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 penglin1984(penglin1984) 发表:
感谢朋友们的指导与帮助。我的药物用100%乙腈溶解并定容，所设定的流动相比例为乙腈：水=18：82。用150mm短柱子，0.8mL/min分析的时候，峰形分叉，而且峰很宽。调整了流动相比例20：80，25：75，30：70，保留时间有所改变，但峰形还是分叉。后来换上了250mm的长柱子，流动相比例设为30：70，流速设为0.6mL/min的时候，目标峰峰形很好，不分叉，且拖尾因子很小。不知道在这种情况下，溶剂效应是否有影响？

治标不治本。这样的调整仅仅是把峰形劣变的作用通过延长分离时间稍微掩盖了一下。问题的原因是标准液配制应该使用较低浓度的乙腈，至少应该降到50%以下。流动相比例应以确保与其他成分分离为准，包括色谱柱的选择，这些条件一旦确定不要轻易变更。

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