主题：【求助】HPLC如何查看实际流速和控制每次测定压强相同

原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
1、只要仪器是正常的，你设定的流速就是真正的流速，还可以用容量瓶或量筒接取一定时间的废液来计算实际的流速。
2、压力与色谱柱，流动相的组成，流速的大小等有关系，液相一般都是恒流泵，无法恒定压力。
3、压力对测定有影响的具体体现是什么？

原文由 微雨燕双飞(godblesschina) 发表:
怎么说呢。我觉得您疑心有点儿重。目前的液相色谱仪均为恒流泵(单位时间内排出恒定体积的流动相)，其优点在于不论压力有多高，当您设定了体积流速，它就能向色谱柱输出恒定体积的流动相。系统压力几乎不会影响到流速，即使系统压力因其他原因持续变化(其他原因不包括漏液和温度剧烈变化)。
您的想法依据是，压力决定流速，压力变化流速变化，这是恒压泵的理念。

原文由 xl1209(xl1209) 发表:

原文由 微雨燕双飞(godblesschina) 发表:
怎么说呢。我觉得您疑心有点儿重。目前的液相色谱仪均为恒流泵(单位时间内排出恒定体积的流动相)，其优点在于不论压力有多高，当您设定了体积流速，它就能向色谱柱输出恒定体积的流动相。系统压力几乎不会影响到流速，即使系统压力因其他原因持续变化(其他原因不包括漏液和温度剧烈变化)。
您的想法依据是，压力决定流速，压力变化流速变化，这是恒压泵的理念。

呵呵，不是俺疑心重，只是遇到的问题，我无法找到合适的解释。一直认为当其他条件都一致，只考虑流速和压力的情况下，流速会影响出峰时间，而压力不会，因为压力会受阀门的旋紧程度影响，拧的越紧压力越高，如果压力能影响出峰时间，每个人拧的或者同一个人不同批次拧的程度会不同，这样就导致结果无法重现。但在前天的试验中发现，当流速设定在某个恒定值后，阀门拧的松时，压力稳定在一个较低的值，进标样测定发现出峰时间延长，而且响应值（峰高和峰面积）都增加；而在拧的更紧时，压力稳定到一个较高的值，进同样的标样则出峰时间提前，响应值降低。这用原来的想法很难解释，我们组的师姐告诉我可能是压力导致流速并没有达到实际设定值，让我观察下废液的流出情况，发现废液流出稳定，并没有异常，很纳闷，所以在这里求助，希望得到专家的指点。如果压力不影响流速，也不影响出峰时间，那会是仪器的那个方面出了问题呢？

原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
影响保留时间的因素太多，流动相的比例（不可能每次的配比完全一样），环境温度，色谱柱性能（长期使用可使柱效下降，柱压力升高，有效填料减少），我觉得压力大与保留时间没有直接的关系。

请问，您说的阀门是指柱塞杆后色谱柱前的“purge阀”吗？如果是。“阀门拧的松时，压力稳定在一个较低的值，进标样测定发现出峰时间延长，而且响应值（峰高和峰面积）都增加；而在拧的更紧时，压力稳定到一个较高的值，进同样的标样则出峰时间提前，响应值降低。”，拧的松，柱前漏液，出峰时间延长，这是合理的，但峰高上升则不合理(升高多少？有统计意义么？)拧的松，柱前未漏液，出峰时间提前，这是合理的，但峰高较低则不合理。
从您说到阀门的问题看（压力会受阀门的旋紧程度影响，拧的越紧压力越高，如果压力能影响出峰时间，每个人拧的或者同一个人不同批次拧的程度会不同，这样就导致结果无法重现。），那个阀门出应该是漏液的。另外色谱柱对化合物的保留也可能发生了一些变化。但不该把问题首先怀疑到泵的输出不准确，因为那不是易出问题的地方。

原文由 xl1209(xl1209) 发表:

请问，您说的阀门是指柱塞杆后色谱柱前的“purge阀”吗？如果是。“阀门拧的松时，压力稳定在一个较低的值，进标样测定发现出峰时间延长，而且响应值（峰高和峰面积）都增加；而在拧的更紧时，压力稳定到一个较高的值，进同样的标样则出峰时间提前，响应值降低。”，拧的松，柱前漏液，出峰时间延长，这是合理的，但峰高上升则不合理(升高多少？有统计意义么？)拧的松，柱前未漏液，出峰时间提前，这是合理的，但峰高较低则不合理。
从您说到阀门的问题看（压力会受阀门的旋紧程度影响，拧的越紧压力越高，如果压力能影响出峰时间，每个人拧的或者同一个人不同批次拧的程度会不同，这样就导致结果无法重现。），那个阀门出应该是漏液的。另外色谱柱对化合物的保留也可能发生了一些变化。但不该把问题首先怀疑到泵的输出不准确，因为那不是易出问题的地方。

1 阀门是指purge阀（排液阀）
2 峰高确实有变化，能达到显著差异。如果purge阀旋紧程度与柱前漏液有关，那么如何判定和确保purge阀拧的程度合适？
3 泵本身是可能没问题，但漏液会不会影响真实的流速呢？如果是漏液，那么压力怎么还能保持恒定呢？

如果您拧purge阀的松紧程度不一样而压力也有变化，那么压力低的时候肯定是漏液了。可能是仪器用得久了，那么您就拧紧一些，并观察purge阀后的排废液管是否有液体流出，如果没有就可以进行实验了，如果漏液那就联系厂家维修吧。