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主题：【求助】求助：梯度洗脱问题？？

浏览0 回复6 电梯直达
popshengu
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发表于：2010/05/08 15:24:40 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我最近在提纯微生物发酵产物，用反相的C18柱和正相的硅胶柱还有佛罗里硅土柱都做了一次。
      反相的C18采用甲醇/水梯度洗脱，水溶液上样，加过发现第一次用纯水洗就下来了。紫外扫描峰也很杂。
      正相的硅胶采用氯仿/甲醇梯度洗脱，甲醇氯仿1:1上样，结果也是第一次甲醇氯仿1:1就全洗下来了。这个紫外峰还没扫。
      佛罗里硅土采用氯仿/甲醇梯度洗脱，甲醇氯仿1:1上样，结果纯的甲醇也洗不下来了。
      非常郁闷啊。各位高手谁能提点意见啊？我现在的这个物质目前只能溶解在水和甲醇里，乙酸乙脂和氯仿以及石油醚都不溶解。极性应该蛮强的。
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2010/5/8 16:31:20 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是周末嘛？怎么没大侠知道的？
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有水有渝
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2010/5/8 19:30:03 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
建议先用ＴＬＣ或液相色谱调整洗脱剂，才能知道用什么洗脱剂合适。
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popshengu
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2010/5/9 15:08:07 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
建议先用ＴＬＣ或液相色谱调整洗脱剂，才能知道用什么洗脱剂合适。


我这个东西只能在水和甲醇种溶解。甲醇和什么极性弱的混溶效果好啊？
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有水有渝
xky0230699
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2010/5/9 15:12:29 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
酯类，乙醇，顺便问一下，你如何确定洗没洗下来？
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2010/5/9 15:13:58 Last edit by xky0230699
〓猪哥哥〓
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2010/5/10 14:36:56 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
调整下甲醇-氯仿的比例减小洗脱强度再试试。每次洗脱出的应该先做tlc，如果纯度稍较高，再纯化，最后才会扫描吧，刚洗脱出扫描出来的图谱肯定不行
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popshengu
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2010/5/11 13:26:25 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
酯类，乙醇，顺便问一下，你如何确定洗没洗下来？


梯度洗脱后每个梯度都没有活性，就是没洗下来了。最后用纯甲醇洗了6个体积，将近30ml的量，还是没活性。应该确定是洗不下来。
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