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毛细管电泳（CE）
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主题：【原创】毛细管内壁聚丙烯酰胺涂层总也不成功，怎么办？

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doris8976
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发表于：2010/05/11 17:43:36 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如题，因为要做DNA筛分，对毛细管内壁进行了涂层，可涂层总是很不稳定，或者根本键合不上去，做DNA筛分就更没有结果了。我用的是经典的改性方法，以前做都可以，成功率90%，可现在怎么也弄不好，着急！哪位做过这方面的东西，能否给指点一下问题究竟在什么地方。谢了！
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sunpengwjh
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2010/5/11 18:46:08 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
键合的条件实验室自己优化的？还是参考文献的？有些文献报道是有所保留的！
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doris8976
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2010/5/12 22:41:22 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
实验室自己优化的，不知道您做过这方面工作没，给点建议吧 ：）
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tus13
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2010/5/12 23:13:14 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主是做痕量检验吧?
我作学生时(七十年代末)作过蝮蛇DNA检验,那时侯样品足够多.是用聚丙烯酰胺凝胶分离蛋白质,再... ...,浓度的影响很大.能够做成功学生的不多.
毛细管电泳分离蛋白没作过,不敢多说.
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userwzy
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2010/5/13 9:12:22 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
灌胶后是不是多保持一会(30min)是不是会好些,冲得时候压力不要太大,运行的缓冲溶液是不是对涂层不友好?
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2010/5/13 10:29:27 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是自由基引发吗？反应的条件控制的如何？
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sunpengwjh
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2010/5/13 11:33:26 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
也做过这方面的，同样也是不稳定，不是涂层厚了，就是没有涂上，我们高温涂的，也是直接反应！效果也不是很好！
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doris8976
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2010/5/20 21:11:25 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
先谢谢大家的回复！因为前面做成功率很高，也就没有去留意每一步的操作，感觉随便改性一下都可以成功的，但现在却怎么也涂不上去，郁闷之极！
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