主题:【原创】【极限体验】月旭XB-C18色谱柱对复方石韦胶囊中苦参碱含量检测

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雪妖
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该帖子已被zxhcnf设置为精华;
有段时间没有来了,月旭版越来越红火,客套话不说,直接上正文。

于2006年给一家药厂制定的改剂型类新药申报资料,我主要负责含量测定的标准制定,现在主要说的是色谱条件摸索的一些小结,说不上经验,因为时间较久,就没有色谱图,就看看文字,希望对大家有帮助。

复方石韦胶囊
[主要成份]:石韦、黄芪、苦参、扁蓄。
[功能主治]:清热燥湿,利尿通淋。用于小便不利,尿频,尿急,尿痛,下肢浮肿等症;也可用于急慢性肾小球肾炎,肾盂肾炎,膀胱炎,尿道炎,见有上述证状者。

检测成分:苦参碱
分析仪器:岛津高效液相色谱仪
                    紫外检测器
                    手动进样阀

一、检测波长确定:
      配置苦参碱的标准溶液,浓度为5.0μg/ml,于紫外分光光度计中进行波长扫描,确定最大吸收波长;
根据波长扫描结果和参照相关方法,确定检测波长为:220nm

二、色谱条件建立:
1、色谱柱:大连某家ODS  C18(250mm*4.6mm,5.0μm)
      流动相:甲醇:水:三乙胺(50:50:0.2)
      柱温:40℃
      流速:1.0ml/min
      检测波长:220nm
色谱图:
    S-001: 保留时间 11.000min        峰形较差,呈馒头样
    Y-001: 保留时间 11.005min        与目标峰的前一个杂质峰无法分开,更改色谱条件

2、色谱柱:大连某家ODS  C18(250mm*4.6mm,5.0μm)
      流动相:乙腈:磷酸水溶液(PH:2.0):无水乙醇(80 :10 :8)
      柱温:40℃
      流速:1.0ml/min
      检测波长:220nm
色谱图:
    S-002: 保留时间 15.093min        峰形较差,保留时间较长
    Y-002: 保留时间 15.102min        与目标峰的前一个杂质峰无法分开,更改色谱条件

由于峰形较差,理论板数较低,更换色谱柱。(换下的色谱柱,用另一台LC进行冲洗)

3、色谱柱:上海某家 C18(250mm*4.6mm,5.0μm)
      流动相:乙腈:磷酸水溶液(PH:2.0):无水乙醇(80 :10 :8)
      柱温:40℃
      流速:1.0ml/min
      检测波长:220nm
色谱图:
    S-003: 保留时间 19.537min        峰形较差,保留时间较长
    Y-003: 保留时间 19.601min        与目标峰的前一个杂质峰无法分开,更改色谱条件

由于峰形较差,理论板数较低,更换色谱柱。(换下的色谱柱,用另一台LC进行冲洗)

4、色谱柱:月旭XB C18(250mm*4.6mm,5.0μm)
      流动相:乙腈:磷酸水溶液(PH:2.0):无水乙醇(80 :10 :8)
      柱温:40℃
      流速:1.0ml/min
      检测波长:220nm
色谱图:
    S-004: 保留时间 16.024min        峰形较好,保留时间较长
    Y-004: 保留时间 16.099min        与目标峰的前一个杂质峰无法分开,更改色谱条件

5、色谱柱:月旭XB C18(250mm*4.6mm,5.0μm)
      流动相:甲醇:水:三乙胺(50:50:0.2)
      柱温:40℃
      流速:1.0ml/min
      检测波长:220nm
色谱图:
    S-005: 保留时间 11.398min        峰形好
    Y-005: 保留时间 11.297min        与目标峰的前一个杂质峰无法分开,更改色谱条件

6、色谱柱:月旭XB C18(250mm*4.6mm,5.0μm)
      流动相:甲醇:水:三乙胺(50:70:0.2)
      柱温:40℃
      流速:1.0ml/min
      检测波长:220nm
色谱图:
    S-006: 保留时间 13.110min        峰形好
    Y-006: 保留时间 13.082min        与目标峰的前一个杂质峰无法分开,更改色谱条件

在以上实验中,确定了色谱柱和检测波长,柱温,流速,苦参碱的出峰时间和顺序,为了节约时间,在以下的色谱条件选择中考察是否能样品中杂质峰分离

7、流动相:甲醇:水:三乙胺(50:71:0.2)
色谱图:
        Y-007: 保留时间 13.570min        与目标峰的前一个杂质峰无法分开,更改色谱条件

8、流动相:甲醇:水:三乙胺(50:75:0.2)
色谱图:
        Y-008: 保留时间 13.390min        与目标峰的前一个杂质峰无法分开,更改色谱条件

9、流动相:甲醇:水:三乙胺(80:75:0.2)
色谱图:
        Y-008: 保留时间 8.800min        与目标峰的前一个杂质峰无法分开,更改色谱条件

10、流动相:甲醇:水:三乙胺(80:100:0.2)
色谱图:
        Y-008: 保留时间 25.950min        与目标峰的前一个杂质峰完全重合,更改色谱条件

11、流动相:甲醇:水:三乙胺(60:40:0.2)
色谱图:
        Y-009: 保留时间 8.920min        与目标峰分开,分离度1.95

复方石韦胶囊中苦参碱含量检测色谱条件:

分析仪器:高效液相色谱仪
                    紫外检测器
色谱条件:
    色谱柱:月旭XB C18(250mm*4.6mm,5.0μm)
      流动相:甲醇:水:三乙胺(60:40:0.2)
      柱温:40℃
      流速:1.0ml/min
      检测波长:220nm

小结:
1、苦参碱为碱性物质,故在流动相中加入三乙胺作为碱性调节剂,但是该种物质和水溶解度较小,在配置流动相时要尽量的混匀;
2、在该样品中,由于苦参碱和前一个杂峰对流动相的敏感度想接近,在做流动相调节时,相互成分之间的比例作较大调整,如果调整较小,两个峰同时向前或向后移动,故没有明显的分离效果。

因为没有色谱图,没有办法做很直观的比较,请大家耐心的看,多提宝贵意见。
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原文由 yongw(yongw) 发表:
谢谢楼主分享


希望对你有帮助,是一个选择色谱条件的一个方向
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2010/5/18 17:17:59 Last edit by czj_1027
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确定了波长、柱温、流速外,又调了4次流动相,才得到好的谱图,真是有耐心,值得学习。
zxhcnf
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雪妖的作品真是能让人学到不少东西,直接就是一篇方法开发的教材啊
雪妖
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原文由 zxhcnf(zxhcnf) 发表:
雪妖的作品真是能让人学到不少东西,直接就是一篇方法开发的教材啊


谢谢夸奖

色谱条件选择的时候就是要很细心的,可惜是没有色谱图了,用月旭的色谱柱很久,做的东西也多,再找找有什么可以和大家分享的
请大家多多指教
雪妖
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三乙胺对色谱柱的损伤是不易逆转的。


这个不是吧
我认为是没有的
我们06年做了,然后厂家拿到了试生产的资格
那就要做两年,就是用的月旭的这款色谱柱
现在都没有什么问题,这也是他们较重要的产品,经常检测的
因为我的一个师妹在那边,所有了解比较清楚的
lxx5052
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雪妖的作品真是能让人学到不少东西,直接就是一篇方法开发的教材啊
是该向雪妖多多学习哦,呵呵
雪妖
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雪妖的作品真是能让人学到不少东西,直接就是一篇方法开发的教材啊
是该向雪妖多多学习哦,呵呵


哈哈,不敢当呢
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