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主题：【第六届原创】【许愿原创】有关物质检测方法之痛苦抉择【dahua1981推荐】

浏览0 回复129 电梯直达
逆天一棍
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光谱发表于：2013/10/01 14:22:16 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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维权声明：本文为fengmo4668原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。
近来拿到一个分析方法，用来检测某制剂中主药的有关物质的含量。色谱柱是C18的色谱柱，流动相体系是缓冲盐和乙腈的混合梯度。

关于检验有关物质，我一般首先考虑等度洗脱，详见主题：对于有关物质检测方法开发的一些理解http://bbs.instrument.com.cn/topic.asp?threadid=4993353

在拿到这个方法，看到是梯度的条件，就想着用等度的方法改进。

选用博纳艾杰尔的Venusil XBP C18（L）色谱柱，4.6*150mm，5μm；Cat. ：VX951505-L；S/N：V9520515BM0106，柱温30℃，检测波长为240nm，进样量10μL，流速为1ml/min。

先用原方法走一遍，确定目标峰的出峰情况和个数：其中21min为主药的保留时间，后面28min的为一个辅料的色谱峰。



因为前面的思路，换成等度进行洗脱：



问题出来了，28min色谱峰居然在洗脱了110min后还是没有出来！



再换了梯度，色谱图是这样的：



上一针的辅料峰出来了，与这一针辅料峰的保留时间相比，居然才相差了2min！也就是说，用等度的方法，走了100多分钟，辅料料几乎在色谱柱上没有移动，完全保留在填料上了。只是再走梯度的时候，才进行了有效的洗脱！

也考虑调整等度时缓冲盐和有机相的比例，使各有关物质峰有效分离的前提下，辅料峰尽早洗脱。但是辅料峰洗脱了，前面的分离度达不到要求了；分离度合适了，辅料峰又无法洗脱了！

也想过在前处理的时候除去辅料峰，但是换了几种前处理方法，虽然可以把辅料峰有效缩小，但是没有办法完全消除，而且还容易带进来别的杂质峰。

实在不得已，只能又走回到原来梯度洗脱的老路上！真是痛苦啊！
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zhw19811005
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2013/10/1 15:39:24 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
又回到了原来的方法。应该还是有途径解决的
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逆天一棍
fengmo4668
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2013/10/2 8:31:42 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 zhw19811005(zhw19811005) 发表:
又回到了原来的方法。应该还是有途径解决的
也不是单纯的回到了老方法，还是有一点的改进的。最主要的是，摸清了样品和色谱条件之间的关系了。还是有收获的。
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吕梁山
shih20j07
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2013/10/8 22:55:49 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
梯度洗脱是没有办法的办法啊
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冰火女孩
xuwanxiu2006
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2013/10/9 8:58:19 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这峰型怎么这么好，我们刚换的柱子峰型也没有这么好过。
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dahua1981
dahua1981
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2013/10/9 9:00:57 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
梯度洗脱还是省时间的
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吕梁山
shih20j07
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2013/10/9 23:41:34 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
反正准确为原则吧
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逆天一棍
fengmo4668
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2013/10/10 11:40:22 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 吕梁山(shih20j07) 发表:
梯度洗脱是没有办法的办法啊
确实是如此
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逆天一棍
fengmo4668
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2013/10/10 11:41:21 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 冰火女孩(xuwanxiu2006) 发表:
这峰型怎么这么好，我们刚换的柱子峰型也没有这么好过。
不是吧？

建议用博纳同类型的色谱柱试试。
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逆天一棍
fengmo4668
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2013/10/10 11:43:14 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 dahua1981(dahua1981) 发表:
梯度洗脱还是省时间的
是的。梯度洗脱，在节省时间、试剂、能源、经济上还是比较划得来的。
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逆天一棍
fengmo4668
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2013/10/10 11:44:09 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 吕梁山(shih20j07) 发表:
反正准确为原则吧
这个是必须的！
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