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主题：【求助】Beckman P/ACE MDQ如何实现单细胞进样及缓冲液问题

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katherine7
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发表于：2010/05/20 20:57:06 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我是毛细管电泳仪方面的新手，将做单细胞分析方面的工作，期盼高手指教。我们这边的是Beckman P/ACE MDQ毛细管电泳仪。
但是，我始终弄不清该如何进样比较好，不知是否有高手做过这方面的工作，希望您能给我一些宝贵的建议。
问题      1. 如何实现单细胞进样（之前试过，用PBS重悬细胞后，进行进样，电流很高，且未出峰）
              2. 缓冲液用哪种比较好
              3. 如果提细胞总DNA后再进样，缓冲液之类的问题该如何解决
             
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2010/5/21 11:13:30 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
建议试试压力进样，看看效果怎么样！不知道楼主做过没做过！
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lisa_a
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2010/5/21 14:14:24 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我的仪器和你的是一样的，我们也将要做单细胞分析，进样确实个问题，不过我们联系了工程师，要配置一个进样的东西，也就是把现在进样的那一部分引到电泳仪外边，然后配置一台显微镜，这样可以在显微操作下进行单细胞进样。缓冲液的类型我们正在筛选中，以后跟楼主再交流，提细胞总DNA后，先跑胶看是不是呈现梯状条带，然后进行电泳分析，缓冲液最好根据你DNA的背景液进行筛选，祝你好运~
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katherine7
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2010/5/22 10:32:54 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢楼上的回复哦
试过压力进样了，但是效果还是不行。
将细胞浓度稀释到很低，是否可以类似于单细胞看呢？
现在光是缓冲液的问题，都头大咯
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baiyunshan
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2010/6/1 13:59:32 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 lisa_a(lisa_a) 发表:
我的仪器和你的是一样的，我们也将要做单细胞分析，进样确实个问题，不过我们联系了工程师，要配置一个进样的东西，也就是把现在进样的那一部分引到电泳仪外边，然后配置一台显微镜，这样可以在显微操作下进行单细胞进样。缓冲液的类型我们正在筛选中，以后跟楼主再交流，提细胞总DNA后，先跑胶看是不是呈现梯状条带，然后进行电泳分析，缓冲液最好根据你DNA的背景液进行筛选，祝你好运~

请问一下你们检测细胞，用的检测器是激光诱导荧光装置还是其他的检测器？
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lzldnn
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2010/6/1 20:53:34 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
猜测楼主所感兴趣的是DNA，莫非是用紫外或者DAD检测器？据我所知，P/ACE 所配的三种检测器里面只有LIF可以满足单细胞分析的检测限要求。在目前见诸文献报道的单细胞电泳分析中，多以实验室自制的改装仪器为多，常见的检测器为激光诱导荧光检测器，纳米电极电化学检测器，还有化学发光检测器。建议楼主多给些信息，单细胞毛细管电泳分析，可以参考一下化学所陈义研究员的书籍资料，还有武汉大学程介克老师的《单细胞分析》一书
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2010/6/1 21:13:35 Last edit by lzldnn
katherine7
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2010/12/26 13:50:58 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 baiyunshan(baiyunshan) 发表:
原文由 lisa_a(lisa_a) 发表:
我的仪器和你的是一样的，我们也将要做单细胞分析，进样确实个问题，不过我们联系了工程师，要配置一个进样的东西，也就是把现在进样的那一部分引到电泳仪外边，然后配置一台显微镜，这样可以在显微操作下进行单细胞进样。缓冲液的类型我们正在筛选中，以后跟楼主再交流，提细胞总DNA后，先跑胶看是不是呈现梯状条带，然后进行电泳分析，缓冲液最好根据你DNA的背景液进行筛选，祝你好运~

请问一下你们检测细胞，用的检测器是激光诱导荧光装置还是其他的检测器？


sorry哦，才回复你。之前是UV
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katherine7
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2010/12/26 13:55:11 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 lzldnn(lzldnn) 发表:
猜测楼主所感兴趣的是DNA，莫非是用紫外或者DAD检测器？据我所知，P/ACE 所配的三种检测器里面只有LIF可以满足单细胞分析的检测限要求。在目前见诸文献报道的单细胞电泳分析中，多以实验室自制的改装仪器为多，常见的检测器为激光诱导荧光检测器，纳米电极电化学检测器，还有化学发光检测器。建议楼主多给些信息，单细胞毛细管电泳分析，可以参考一下化学所陈义研究员的书籍资料，还有武汉大学程介克老师的《单细胞分析》一书


谢谢你的信息，你推荐的这两本书，在看中。用的是激光诱导荧光检测器，不过我们这边没有改装。因为一些原因，现在在做CE核酸分离，没做单细胞分析了。期待继续交流哦！Thank you!
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