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主题：【第二届网络原创大赛参赛作品】毛细管区带电泳一次基线乱的处理过程

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sunpengwjh
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发表于：2009/12/02 08:48:55 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
该帖子已被环保兄设置为精华； 奖励积分记录： 环保兄(20分)
毛细管区带电泳一次基线乱的处理过程
在用毛细管电泳进行分离和检测时，经常会出现基线或谱图不好的情况，下面就这种现象可能存在的原因进行分析，将这种谱图乱分为两种情况，一种为进样前，另一种为进样后来分析，首先看一下进样前出现基线乱、上下乱跳的情况（如图1），及可能的原因。


图1 区带电泳基线谱图
一、进样前出现类似的问题可以按一下步骤来排查：
1、判断这样的谱图出现的几率，如果是经常出现，那这就说明仪器或是实验条件存在问题；
2、先确定柱子处理好了么，新购买的毛细管柱子管壁有很多酯类物质和杂质，而且管壁的羟基也需要活化，如果柱子处理不好很容易出现如图1这样的基线。
3、如果柱子处理没有问题，我们应该检查一下缓冲溶液是不是存在问题，配置的时间是不是太久了，如果时间太久了，缓冲溶液里边就会出现絮状的物质，这样也会导致上述现象的发生。
4、确定检测器处或柱子的检测口处是不是污染。从仪器上取下卡盒，取下柱子，查看柱子的检测口处和固定毛细管检测窗口的位置是不是不干净，如果有可以把用乙醇清洗或擦拭！
5、检查一下电泳仪的电极是不是弯了，有的时候电极弯了也会影响基线。
经过排查发现发现毛细管的检测口处有污物，用酒精棉将其试去，在走基线，得到如下谱图，如图2所示。


图2
二、进样后出现谱图乱的情况，可能的原因如下：
1、溶解样品所用的溶液和缓冲溶液不一致。这种情况下，由于缓冲溶液是一个背景值，进样后，样品溶液又是一个背景值，所以很容易出现这种情况，这种情况下还很有可能出现平台谱图！
2、确保样品的稳定性。查阅相关资料，确定样品在所选用的缓冲溶液里边是不是稳定，如果不稳定，容易降解，很容易出现图1的情况，就应该选用其他体系的缓冲溶液。
3、pH问题。如果溶解样品溶液的pH和缓冲溶液的pH不一致，进样后同样会出现这样上下跳动的谱图。
以上是从实验中发现和总结的部分可能的原因，请大家提出宝贵意见！

该帖子作者被版主 独钓寒江雪加 15积分， 2经验，加分理由：原创作品奖励
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cpudaxiao
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2009/12/2 9:04:31 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
看到图一的第一反应就是样品遇到缓冲液析出来了，
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i_am_ling
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2009/12/9 16:02:39 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
斑竹果然是版主，很多实际的经验和大家分享，谢谢斑竹，很好的资料！
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〓疯子哥〓
madprodigy
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2009/12/10 9:34:58 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
基线不稳定如果不能一步到位能排查原因，只有按部就班的每个部分检查排除，这样才能更好的解决问题
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spying
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2009/12/11 9:05:29 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢斑竹分享经验，这回在遇到类似的问题就可以解决了！
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simontang
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2009/12/25 15:06:02 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢斑竹分享经验，遇到类似的问题就可以解决了！
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spfeng
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2009/12/26 8:53:55 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不错的东东，值得学习！遇到这样的问题完全可以解决了！非常感谢楼主！
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小雨哥
zhchyu
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2009/12/30 10:41:35 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
版主太牛了啊！辛苦辛苦！
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chengjingbao
chengjingbao
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2010/1/3 10:30:46 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
图例结合，讲解清晰，学习！
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老多_小多
emoc98311
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2010/1/3 21:42:56 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不错的实际经验
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天字一号猪
lifen4607
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2010/1/4 14:05:20 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
基线怎么是下飘的呢？
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