主题:【求助】关于安捷伦电泳仪的基线毛刺和峰形拖尾问题

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dates
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用的是安捷伦的毛细管柱子,自己截的以及烧制的窗口,活化步骤是先用0.5M NaOH溶液冲洗10min,超纯水冲洗60min,0.1M HCl溶液冲10min,超纯水冲30min,pH2.5、30mM的磷酸缓冲液冲30min,溶液均过0.2微米的膜,冲洗的过程中基线还不错,但是进样的时候基线的毛刺就挺明显的,想求助各位大神是什么原因呢?

看以前的帖子,建议说清洁检测窗口,想请问一下具体应该怎么清洁呢?跪谢啦~



今天进样的时候,用的是超声的缓冲液,毛刺现象还在,而且峰形有很严重的拖尾,这个浓度是50ppm,之前进的10ppm的也有拖尾,感觉应该不是浓度的问题,求助各位造成基线毛刺和峰拖尾的原因以及解决办法
该帖子作者被版主 wy200717225积分, 2经验,加分理由:发帖鼓励
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v2812644
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用的是安捷伦的毛细管柱子,自己截的以及烧制的窗口,活化步骤是先用0.5M NaOH溶液冲洗10min,超纯水冲洗60min,0.1M HCl溶液冲10min,超纯水冲30min,pH2.5、30mM的磷酸缓冲液冲30min,溶液均过0.2微米的膜,冲洗的过程中基线还不错,但是进样的时候基线的毛刺就挺明显的,想求助各位大神是什么原因呢?
看以前的帖子,建议说清洁检测窗口,想请问一下具体应该怎么清洁呢?跪谢啦~


基线的毛刺有几个方面的原因,请逐一排查:

1。检测窗口不干净。特别是自己烧制的窗口。推荐方法可以用两小块铝箔包住要烧制的窗口两边的位置以保护涂层,中间留出大约2~3mm的空间,然后拿打火机一燎,发现涂层红了就立即拿开打火机。然后用酒精棉或者蘸水的镜头纸擦去烧黑的涂层即可。当然你可以采用电阻丝的方法来烧制窗口。在烧红的电阻丝上面滚一圈就好。也很方便。

2。氘灯能量不足。这个可以通过灯能量测试来考察。表现为基线的波动较大且频繁。

3。缓冲溶液中有气泡。这个可以通过超声,或者在毛细管两端加压的方式解决。

BTW: 毛细管活化的建议步骤:1M NaOH 冲洗10min, 静置10min,水冲洗10min。搞定。根本不需要那么复杂步骤。我从99年开始做电泳,一直都是如此的。
该帖子作者被版主 xsh67432积分, 2经验,加分理由:不错
beyond1977
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用的是安捷伦的毛细管柱子,自己截的以及烧制的窗口,活化步骤是先用0.5M NaOH溶液冲洗10min,超纯水冲洗60min,0.1M HCl溶液冲10min,超纯水冲30min,pH2.5、30mM的磷酸缓冲液冲30min,溶液均过0.2微米的膜,冲洗的过程中基线还不错,但是进样的时候基线的毛刺就挺明显的,想求助各位大神是什么原因呢?
看以前的帖子,建议说清洁检测窗口,想请问一下具体应该怎么清洁呢?跪谢啦~


上张图谱看看
v2812644
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通过你的图谱,我可以排除溶液气泡的因素。

我个人建议你,首先检查和清洗毛细管窗口。如果没问题的话,做一下灯能量测试,Agilent的工作站里面有这样的功能的,如果你不会可以问我。

关于峰拖尾,这是由于化合物和毛细管壁有相互作用。能否告知你的化合物名称,以及采用的缓冲溶液体系。也可以私信我。
该帖子作者被版主 nini20064积分, 2经验,加分理由:很耐心的解答,不错!
wy20071722
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还有可能是管子活化的不充分。
该帖子作者被版主 xsh67432积分, 2经验,加分理由:柱子没活化好确实也有可能
ericwong
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峰拖尾有可能是因为吸附,将毛细管好好处理一下试试
nini2006
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这个帖子可能对你有帮助:
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20130805/4889933/
dates
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多谢大家的帮助,我的问题已经解决了,因为我用的是酸性的缓冲溶液,然后我在每一针中间都用氢氧化钠冲了2分钟,所以导致了pH不稳定,造成了拖尾,去掉了冲洗,峰形就好多了。
然后基线的问题,我发现还是窗口的问题,重新烧了窗口,基线恢复了~
CEcret
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原文由 dates(dates) 发表:
多谢大家的帮助,我的问题已经解决了,因为我用的是酸性的缓冲溶液,然后我在每一针中间都用氢氧化钠冲了2分钟,所以导致了pH不稳定,造成了拖尾,去掉了冲洗,峰形就好多了。
然后基线的问题,我发现还是窗口的问题,重新烧了窗口,基线恢复了~


一定要避免两针之间冲洗的时候毛细管壁的pH剧烈变化,会造成结果的不稳定的。基线的问题多半都是窗口没对准或者氘灯太久了。
dates
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原文由 CEcret(v2812644) 发表:
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多谢大家的帮助,我的问题已经解决了,因为我用的是酸性的缓冲溶液,然后我在每一针中间都用氢氧化钠冲了2分钟,所以导致了pH不稳定,造成了拖尾,去掉了冲洗,峰形就好多了。
然后基线的问题,我发现还是窗口的问题,重新烧了窗口,基线恢复了~


一定要避免两针之间冲洗的时候毛细管壁的pH剧烈变化,会造成结果的不稳定的。基线的问题多半都是窗口没对准或者氘灯太久了。


对滴对滴,还好我的这些问题都是窗口的问题,不过我用的这台仪器的氘灯也用了好久了,希望它还能坚持坚持啊~
beyond1977
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多谢大家的帮助,我的问题已经解决了,因为我用的是酸性的缓冲溶液,然后我在每一针中间都用氢氧化钠冲了2分钟,所以导致了pH不稳定,造成了拖尾,去掉了冲洗,峰形就好多了。
然后基线的问题,我发现还是窗口的问题,重新烧了窗口,基线恢复了~


一定要避免两针之间冲洗的时候毛细管壁的pH剧烈变化,会造成结果的不稳定的。基线的问题多半都是窗口没对准或者氘灯太久了。


对滴对滴,还好我的这些问题都是窗口的问题,不过我用的这台仪器的氘灯也用了好久了,希望它还能坚持坚持啊~


是窗口没做好还是有脏东西附在上面,总之问题解决了就好
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