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紫外可见分光光度计（UV）
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主题：【资料】分光光度计的应用2-蛋白质的测定

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发表于：2010/07/09 22:17:21 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
蛋白质的直接定量（UV法）

  这种方法是在280 nm波长，直接测试蛋白。选择 Warburg公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。

  蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质，一般要消除320 nm的“背景”信息，设定此功能“开”。与测试核酸类似，要求 A 280 的吸光值至少大于 0.1A，最佳的线性范围在1.0-1.5 之间。实验中选择 Warburg 公式显示样品浓度时，发现读数“漂移”。这是一个正常的现象。事实上，只要观察A 280的吸光值的变化范围不超过 1%，表明结果非常稳定。

  漂移的原因是因为 Warburg公式吸光值换算成浓度，乘以一定的系数，只要吸光值有少许改变，浓度就会被放大，从而显得结果很不稳定。

  蛋白质直接定量方法，适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说，速度快，操作简单；但是容易受到平行物质的干扰，如DNA 的干扰；另外敏感度低，要求蛋白的浓度较高。
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2010/7/14 21:52:24 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
蛋白质现在一般都用凯式定氮法测定
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fzy
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2010/7/19 13:56:43 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
紫外法较快，考马斯亮蓝G250法也不错。不过按方法操作的实际效果都不太理想，可能是样品处理上出了点问题。
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