主题：【求助】大虾们替我看看到底是哪里出了问题

试漏！还有柱温是否有太大的波动，检查一下。

清洗  过程：蒸馏水--甲醇（色谱纯）--90%甲醇+10%蒸馏水溶液--蒸馏水--流动相清洗

估计是新柱没有活化好。。。
自己再好好活化一下------
活化时间太短 自己根据说明书做一下吧  然后再进样----

1.楼主说用的是新柱子，请问在用之前你是怎么活化的呢？我一般是0.5流速的甲醇冲洗2h以上
2.看了你的第二张图，那个峰是你的目标峰吗？如果是的话，感觉好像浓度有点高，要不就是流动相还需要调整
3.后面出的峰行都不好，我怀疑是你的柱子有问题了，峰型极难看呵呵
4.最后一张图，你的检测器没有关吧，我就遇到过这种情况，弄了半天才发现是方法里面忘记开检测器了，
5.楼主的整套仪器都有接地吗？如果没有的话，我有点怀疑最后一张图是由于静电引起的

别的不说，最后一张图不像基线呀，怎么看都像压力图放大后的。

原文由 lzh-zds(lzh-zds) 发表:
纯水可以直接走柱子吗？？？？

和样品状态还是有关系的，结合图谱和样品开判断

=。= 最后检查结果是B泵坏了。。然后里面确实也有气泡
谢谢各位的帮忙！

你的柱子是个人没有处理好啊，按我说的好好处理下肯定做好。经验是一点点积累的
现在用的最多的就是反相C18色谱柱,在平时的工作中,个人积累了一些小经验,很管用的，在此与大家分享。
1、新柱的处理：我们每次新买的柱子虽然是经厂家测试过并密封好的，可是有的柱子到达手中时已经过很长的时间了，因此，我们每拿到一根新的色谱柱都必须要对柱子进行处理。首先，是配制好65%的乙腈/水，再把色谱柱正确的连接在色谱仪上，出口放空（注意：出口端切不可连上检测器，以免污染了检测器），以低流速0.1ml/min~0.5ml/min（如果是LC/MC柱子，则应以0.3 ml/min进行）均可，不可以高流速进行，等看见柱子出口有液体流出后，过20分钟后再接上检测器，以循序渐进的方法将流速调至1.0ml/min（如果是LC/MC柱子则应以0.3 ml/min进行），继续冲洗2~8小时。
2、新柱的使用：首先我们确认所分析样品流动相的PH是不是在色谱柱PH的耐受范围之内，以免损伤柱子!如果，确认在柱子的使用范围之内，就用做样品的流动相平衡柱子(如果流动相中含用缓冲盐溶液，在平衡柱子之前务必要先用5%甲醇或5%乙腈去过渡30分钟以上。再用带盐的流动相去平衡色谱柱。)当色谱柱平衡了足够时间，基线非常平稳的时候，方可进样分析。不管是分析什么样的产品，由于各种各样的因素，样品中总有杂质。因此，最好在色谱柱前端加上保护柱。以增加色谱柱的使用寿命！
3、色谱柱清洗：①如果样品分析中只用到一般的乙腈、甲醇和水的流动相，在做完样品之后可直接用55%~65%乙腈/水或者用55%~65%甲醇/水冲洗色谱柱40~80分钟，然后以纯甲醇或乙腈冲洗30分钟，即可保存；②如果样品分中流动相里含用缓冲液或酸或离子对试剂的流动相，在做完样品之后的清洗必须按照如下步骤进行清洗柱子:先用5%的甲醇/水或5%的乙腈/水，以1ml/min,冲洗1.5小时以上(如果色谱柱更长，则还需要增加适当时间);然后用55%甲醇/~水65%/水冲洗色谱柱30~60分钟.最后用甲醇或乙腈以1ml/min 冲洗30分钟。
4、色谱柱的再生：当色谱柱用过很长的时间之后，就可能发生柱压力升高、分离度不好、柱效降低、峰形不好等等情况，这时我样就需要对色谱柱进行再生，以延长色谱柱的使用寿命。具体方法有如下两种：①先用5%甲醇/水或者是5%乙腈/水，把色谱柱反向以1ml/min,冲洗60分钟以上.然后用四氢呋喃以1ml/min冲洗30分钟以上；再用65%甲醇/水或者65乙腈/水，以流速1ml/min冲洗60分钟。最后用纯甲醇或乙腈冲洗30分钟保存即可。
备注：甲醇、乙腈、四氢呋喃均要用质量好色谱纯。水用是重蒸留水。

楼主最后一张图的问题我也出现过，用的是纯甲醇洗的，一直洗不成直线，请问是什么原因？难道是系统内太脏了？