主题：【讨论】【月底大奖大讨论】【200积分奖励】如何快速确定激发和发射波长？

原文由 teng1986(teng1986) 发表:
不建议用预扫描功能，很多时候给的并不是被测物质的荧光峰。如果3D扫描功能就简单了，做个3D扫描，其中荧光峰位置不随激发波长变化的差不多就是被测物质的，然后用该发射峰波长做激发光谱扫描，再用得到的激发波长做发射光谱扫描。几个来回一般就可以找到。
假如没有3D功能，就只能用笨方法了，先做紫外扫描，找到一个或几个吸收波长，以此为依据，在固定的间隔波长下做多个发射光谱扫描，同理，荧光峰不随激发波长改变的一般就是啦。
要注意排除散射，杂散光。
个人意见，不对的地方欢迎纠正，呵呵。

原文由 pfz1985(Pfz1985) 发表:
在科研中，对于一种未知的荧光物质，我们如何能快速确定其激发和发射波长？
有效回答5-20个积分奖励！

原文由 liu22spoh(liu22spoh) 发表:
先谢谢各位发言的大侠们！
这几天我就在做这个试验，不知道那是啥荧光物质。
之前没听说过荧光3d扫描，呵呵，还望各位告知一下都有那些品牌的相关仪器。
昨天用激发和发射光谱（300-700nm）的方式来做，发现问题很不少。
1，先在分光光度计上，检测全波长吸收曲线，发现在560nm处有最大的吸收峰，其他波长处基本上没有吸收，这是不是说明这个荧光物质的最大激发波长为560nm呢？
2，我权且把它的最大激发波长当作560nm，结果发现，检测发射光谱的时候，510nm-610nm这个范围之内的发生光均特别大，而峰值依旧在560nm，这是什么原因呢，因为反射光没有被屏蔽掉？我以490nm作为激发光，检测FITC的发射光谱，发现还是490nm两边的发射光信号呈正态分布。
3，为了确保仪器的有效性，我拿FITC做了一下扫描，以700nm作为发射光时，最大的激发波长为490nm；而以750nm为发射光时，最大的激发波长却不是490nm，偏差还蛮大的，这是什么原因呢？
还望大家不吝赐教啊！

原文由 liu22spoh(liu22spoh) 发表:
先谢谢各位发言的大侠们！
这几天我就在做这个试验，不知道那是啥荧光物质。
之前没听说过荧光3d扫描，呵呵，还望各位告知一下都有那些品牌的相关仪器。
昨天用激发和发射光谱（300-700nm）的方式来做，发现问题很不少。
1，先在分光光度计上，检测全波长吸收曲线，发现在560nm处有最大的吸收峰，其他波长处基本上没有吸收，这是不是说明这个荧光物质的最大激发波长为560nm呢？
2，我权且把它的最大激发波长当作560nm，结果发现，检测发射光谱的时候，510nm-610nm这个范围之内的发生光均特别大，而峰值依旧在560nm，这是什么原因呢，因为反射光没有被屏蔽掉？我以490nm作为激发光，检测FITC的发射光谱，发现还是490nm两边的发射光信号呈正态分布。
3，为了确保仪器的有效性，我拿FITC做了一下扫描，以700nm作为发射光时，最大的激发波长为490nm；而以750nm为发射光时，最大的激发波长却不是490nm，偏差还蛮大的，这是什么原因呢？
还望大家不吝赐教啊！