主题：【在线讲座33期】液相色谱柱使用疑难问题解析(答疑结束）

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plexu您好！我有以下问题想请教：
C18柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中，会对柱子有什么损坏吗？ph在2左右。

pH2左右容易使键合在硅胶基质上的固定相水解流失，包括C18和封尾试剂的水解，封尾试剂相对更容易水解。不知道你保存的酸性环境是不是含有缓冲盐，如果不含缓冲盐，只是短期几天保存在酸性流动相中，也不必过份担心，最多相当于这几天一直在使用这根色谱柱，因此减少几天的使用寿命吧；有缓冲盐就麻烦一点，保存期间水分挥发可能会导致缓冲盐结晶在柱内析出，对柱子损伤很大。

没有缓冲盐的，那就好，但是对于峰形的问题还是很发愁，昨天还出了一个问题，同一个样品，在一台仪器上出来时分叉的峰，在另一台是一个峰，并且纯度还蛮高的，出封时间在8-10min，不知道咋办了，所用的条件应该是一样的

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plexu您好！我有以下问题想请教，
请问：我们有一台waters1525色谱仪，最近基线总是呈现波浪形很有规律，波长越小越明显，梯度洗脱时向上飘逸而且后一段时间呈现波浪形，很影响分析，我想问一下，是不是柱子的原因，用的是C18上海安普的？麻烦了1

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plexu您好！我有以下问题想请教，
请问：我是做农药残留分析的 ，用的是UV2487检测器，想问一下，C18色谱柱用什么缓冲液比较好，我以前做三聚氰胺是用柠檬酸，辛烷磺酸钠，也用农药检测行不行？还有用HLB柱能不能去除蔬菜和水果中的杂质？

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plexu您好！我有以下问题想请教，
请问：如果液相色谱谱图基线漂移很大是不是柱子的问题？波长越小的越大，270nm的还不怎么能看出来，230nm的就非常厉害了，有可能是什么原因造成的？谢谢了！

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感谢月旭在本版面做论坛线上讲座！
您好！我有以下问题想请教：
1、对于一根常用的C18住，拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护？为什么要这样做？希望能够详细些，非常感激。
2、测定多肽，一般采用什么柱子？流动相是乙腈和水，还有微量的TFA。特别是像类似三肽的短肽，应该怎么选择柱子？

新柱活化，实际上是一个平衡的过程，除了用流动相平衡外，有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡，特别是测定分子量比较高的多肽，尤其重要。因为分子量高的物质分子，扩散速度慢，平衡所需时间也相应较长。具体平衡方式也很简单，多进几次样品，直到峰面积和保留时间稳定，再进行正式进样测定。
如果要加快平衡时间，把前面用来平衡的进样样品浓度加大，或者不等洗脱完成，连续进样多针。用待测物对新柱平衡，目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。

分子量不高的多肽一般选用常规C18柱就能测定，也有用离子交换柱、水性C18柱和Hilic亲水作用柱的。

非常感谢plexu的回答，还有一点不明白，就是记得以前拿到C18柱，会用甲醇从小流量到大流量慢慢活化，这样做的目的是什么呢？是先用溶剂活化吗？然后再用样品？
还有测定短肽总是冲出来，该怎么解决呢？就是和溶剂峰出在一起，或者出在溶剂峰之前。

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plexu您好！我有以下问题想请教：
C18柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中，会对柱子有什么损坏吗？ph在2左右。

pH2左右容易使键合在硅胶基质上的固定相水解流失，包括C18和封尾试剂的水解，封尾试剂相对更容易水解。不知道你保存的酸性环境是不是含有缓冲盐，如果不含缓冲盐，只是短期几天保存在酸性流动相中，也不必过份担心，最多相当于这几天一直在使用这根色谱柱，因此减少几天的使用寿命吧；有缓冲盐就麻烦一点，保存期间水分挥发可能会导致缓冲盐结晶在柱内析出，对柱子损伤很大。

没有缓冲盐的，那就好，但是对于峰形的问题还是很发愁，昨天还出了一个问题，同一个样品，在一台仪器上出来时分叉的峰，在另一台是一个峰，并且纯度还蛮高的，出封时间在8-10min，不知道咋办了，所用的条件应该是一样的

那就是两仪器柱子的问题咯，你用同一根柱子在两台仪器上做下看看

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plexu您好！我有以下问题想请教：
C18柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中，会对柱子有什么损坏吗？ph在2左右。

pH2左右容易使键合在硅胶基质上的固定相水解流失，包括C18和封尾试剂的水解，封尾试剂相对更容易水解。不知道你保存的酸性环境是不是含有缓冲盐，如果不含缓冲盐，只是短期几天保存在酸性流动相中，也不必过份担心，最多相当于这几天一直在使用这根色谱柱，因此减少几天的使用寿命吧；有缓冲盐就麻烦一点，保存期间水分挥发可能会导致缓冲盐结晶在柱内析出，对柱子损伤很大。

没有缓冲盐的，那就好，但是对于峰形的问题还是很发愁，昨天还出了一个问题，同一个样品，在一台仪器上出来时分叉的峰，在另一台是一个峰，并且纯度还蛮高的，出封时间在8-10min，不知道咋办了，所用的条件应该是一样的

两台仪器用的是一根柱子不？如果不是一根柱子就说明是柱子的问题

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plexu您好！我有以下问题想请教：
C18柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中，会对柱子有什么损坏吗？ph在2左右。

pH2左右容易使键合在硅胶基质上的固定相水解流失，包括C18和封尾试剂的水解，封尾试剂相对更容易水解。不知道你保存的酸性环境是不是含有缓冲盐，如果不含缓冲盐，只是短期几天保存在酸性流动相中，也不必过份担心，最多相当于这几天一直在使用这根色谱柱，因此减少几天的使用寿命吧；有缓冲盐就麻烦一点，保存期间水分挥发可能会导致缓冲盐结晶在柱内析出，对柱子损伤很大。

没有缓冲盐的，那就好，但是对于峰形的问题还是很发愁，昨天还出了一个问题，同一个样品，在一台仪器上出来时分叉的峰，在另一台是一个峰，并且纯度还蛮高的，出封时间在8-10min，不知道咋办了，所用的条件应该是一样的

分叉峰有很多原因，但大部分是柱子筛板上有颗粒物堵塞的原因。你可以先简单将柱子反冲一下，如果分叉问题解决了，就什么都不用往深的想了。

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plexu您好！我有以下问题想请教：
C18柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中，会对柱子有什么损坏吗？ph在2左右。

pH2左右容易使键合在硅胶基质上的固定相水解流失，包括C18和封尾试剂的水解，封尾试剂相对更容易水解。不知道你保存的酸性环境是不是含有缓冲盐，如果不含缓冲盐，只是短期几天保存在酸性流动相中，也不必过份担心，最多相当于这几天一直在使用这根色谱柱，因此减少几天的使用寿命吧；有缓冲盐就麻烦一点，保存期间水分挥发可能会导致缓冲盐结晶在柱内析出，对柱子损伤很大。

没有缓冲盐的，那就好，但是对于峰形的问题还是很发愁，昨天还出了一个问题，同一个样品，在一台仪器上出来时分叉的峰，在另一台是一个峰，并且纯度还蛮高的，出封时间在8-10min，不知道咋办了，所用的条件应该是一样的

那就是两仪器柱子的问题咯，你用同一根柱子在两台仪器上做下看看

这倒是没试
因为仪器不是我们实验室滴
那柱子出了什么问题，会造成这样的结果呢？
是柱子的键合相流失的原因么？

原文由 wkfei1128(wkfei1128) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教：
色谱柱的安装有什么技巧吗？只要保证不漏就行了吗？
还有所谓的死体积怎么测定呢？

测定多肽样品时，十几肽或者二十几肽时，有时峰前延的比较厉害，有时峰拖尾比较厉害，这是什么原因呢？是样品的问题还是柱子的问题？