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液相色谱（LC）
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主题：【在线讲座33期】液相色谱柱使用疑难问题解析(答疑结束）

浏览0 回复384 电梯直达
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wxwupengxu
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2010/9/14 8:41:12 404楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这些问题当中有很多也是我想知道答案的，太全面了，知道答案后能否告诉我一下，谢谢！
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hbj0775
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2010/9/14 17:10:52 405楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请问：液相色谱中检测池的流动相和样品去向？
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firstone
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2010/10/5 22:56:22 407楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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活动结束后能否整理一下，集中附件下载呢？方便些。
网速慢，不好一页页翻。
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kodak2000
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2010/10/8 19:32:50 408楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xue2009(xue2009) 发表:
原文由 xingwangyang(xingwangyang) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教，
请问：我在用液相测定多肽样品时遇到下列问题
1.流动相是A1％三氟乙酸水溶液，B1％三氟乙酸乙腈溶液  波长210  平衡时间太长 基线波动很大  是什么原因？怎么改善？
2.用过后的C18柱怎么清洗比较好。

我认为是三氟乙酸含有杂质的问题，再有可能就是柱子被污染了，平衡时不断有杂质洗脱除，建议你把柱子好好冲洗看看

使用TFA做添加剂时，A相和B相浓度相同时，基线容易漂移，建议两相浓度差15%，例如A1％三氟乙酸水溶液，B0.85％三氟乙酸乙腈溶液
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kodak2000
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2010/10/8 19:38:47 409楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xingwangyang(xingwangyang) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教，
请问：我在做多肽药物时遇到下列问题
        1. 基线不稳定波动大 流动相  A  ：1％TFA水溶液  B:1％TFA乙腈溶液  检测波长210nm  流速：1.0ml/ml  什么原因？怎么解决？TFA有什么作用？
            流动相中不加TFA见不到主峰，基线良好。
          2.  做完肽类样品时  怎么冲洗C18比较好？
        3. 药典上介绍测定分子量大于2000的样品，选择柱子填料的孔径为30nm，30nm与10nm对结果有什么区别

20000以下分子量用130A也没问题的，分子量几W的还是用C18 300A或C4 300A，当用100A孔径时，大分子肽不能进入内孔作用。
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kodak2000
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2010/10/8 19:42:28 410楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 majinfei8(majinfei8) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教，
请问：waters  Atlantis C18柱可以用较高比例的流动相，那麽用完后应该怎麽清洗？在什麽体系中保存比教合适？谢谢。

Atlantis dC18柱可以耐100%纯水相，应用于极性化合物，作为C18柱，还是保存在纯乙腈流动相中。
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kodak2000
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2010/10/8 20:00:58 411楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 plexu(plexu) 发表:
原文由 zqy0797(zqy0797) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教:

您提到“磷酸盐缓冲盐渗透力强，有加快硅胶溶解的副作用，它的存在会降低pH使用范围。”，既然这样，经常使用，柱子寿命是否也下降的快呀？


经常用磷酸盐，在其它条件差不多一样的情况下，柱子寿命肯定比不用磷酸缓冲盐相对短一些。但用磷酸盐也有不可取代的优点吧，否则不可能现在大部分人还在用。

磷酸盐缓冲液优点：
极好的紫外透光率；独特的峰形和色谱分离选择性；多个Pka值（PH2,7,12均可调节）和很好的缓冲容量
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wufenyut
zuochxue
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2010/10/28 11:21:39 415楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
任何改变柱子填料的做法都是不可取的，因为你改变了柱子的均衡，那柱效的损失远大于你清洗前柱子的本身的柱效损失，所以正确的做法还是清洗，反复的清洗。
该帖子作者被版主 xue2009加 2积分， 2经验，加分理由：有道理
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2010/10/28 11:22:20 416楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
任何改变柱子填料的做法都是不可取的，因为你改变了柱子的均衡，那柱效的损失远大于你清洗前柱子的本身的柱效损失，所以正确的做法还是清洗，反复的清洗。
该帖子作者被版主 xue2009加 2积分， 2经验，加分理由：有道理
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lhwgo
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2010/11/8 19:21:39 418楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
plexu您好！我有以下问题想请教，
请问：用100%乙腈冲洗蛋白住大约有十分钟左右，对蛋白柱的影响到底有多大？？
                                                    谢谢O(∩_∩)O
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