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主题：【讨论】血浆样品及胆汁、尿液前处理方法

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huafeihua123
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发表于：2010/08/14 14:11:55 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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大家讨论一下：血浆样品处理方法的前处理方法哪个好，比如液液萃取，还是沉淀蛋白法好？
有听说血浆样品用沉淀蛋白法比较好，胆汁尿液之类的样品用液液萃取法比较多，大家有什么经验分享一下吧
推荐答案：yanliangping回复于2010/08/24
在药代也混了10来年了。

原则上，不管是啥基质，PP沉淀蛋白，  LLE 液液萃取，固相萃取都无所谓，只要回收率稳定就行。

PP快速有效，确定可能有随柱子寿命，预柱或在线过滤器必须有，否则没几针柱压就上去了。本人觉得这种方法只适用于样品较少的非GLP项目，向discovery dmpk等，不过现在好多做临床或临床前新药申报资料的图省事也用PP，实乃不太严谨。

LLE 较PP干净，可以浓缩提高LLOq，但稍费事，大多数的要求较高的实验应该用这种方法，只要找到合适的溶剂，稳定的回收率；该方法还是最可靠的，重复性稳定性都是最佳的。

固相萃取，在线柱切换，多位液相都是适用于研究性质的项目，不要忘了药代实验室是工业领域，美国的药代工业指导原则。

做药代国内的实验室现在大都效率较低，

加空白血浆，内标，溶剂等小于200 ul的应该使用连续加样器，效率比单纯的移液器快10倍，样品多的话

加萃取溶剂用瓶口分液器，比移液器快5倍。

吹干用能带水浴加热的多孔氮吹，孔越多越好

振荡萃取用多管涡旋振荡器（一次半分钟72个样品），比手拿着单个振荡效果不知提高多少。

我知道的一个实验室8个人，一天做1500个样品，

这就是效率

干药代工业事业，必须要好的工具
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hiei
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2010/8/18 11:04:08 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
样品的前处理方法和你检测的项目有关。
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huafeihua123
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2010/8/19 9:26:10 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我做药代动力学，现在做血浆样品
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dmchen1027
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2010/8/19 9:48:52 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一般来说，血浆样品要注意沉淀蛋白，避免大分子进入色谱柱，否则色谱柱很容易堵。尿样，一般用液液萃取，在根据要去性质，最好进行如固相萃取等净化过程。
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huafeihua123
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2010/8/19 10:10:03 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 dmchen1027(dmchen1027) 发表:
一般来说，血浆样品要注意沉淀蛋白，避免大分子进入色谱柱，否则色谱柱很容易堵。尿样，一般用液液萃取，在根据要去性质，最好进行如固相萃取等净化过程。

我现在用的是乙酸乙酯萃取的，做了一段时间，现在保留时间往后推了大概0.2秒，而且一开始柱压没有升的很快，最后几次测样时柱压有点小高，会后来冲冲就又下去了
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2010/8/20 9:32:23 Last edit by huafeihua123
yanliangping
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2010/8/22 17:06:05 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最好是液液萃取，固相萃取太繁琐，昂贵
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wjs74
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2010/8/23 13:46:21 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
能用固相萃取比较好，可以同时除盐、去蛋白和去脂
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职业游民
012304
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2010/8/23 19:13:54 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一般都是去除蛋白以后用固相萃取，到免疫方法中相对简单一些，主要是去蛋白即可

尿样的检测一般比较麻烦，应为里面的成分比较复杂，过柱基本上是必须，
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huafeihua123
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2010/8/24 10:30:16 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 wjs74(wjs74) 发表:
能用固相萃取比较好，可以同时除盐、去蛋白和去脂
固相萃取对我们来说有点不太现实。。。没条件
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huafeihua123
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2010/8/24 10:32:22 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 职业游民(012304) 发表:
一般都是去除蛋白以后用固相萃取，到免疫方法中相对简单一些，主要是去蛋白即可

尿样的检测一般比较麻烦，应为里面的成分比较复杂，过柱基本上是必须，
指的是固相萃取小柱还是预柱啊？
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若初
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2010/8/24 10:44:12 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
要回收率和基质效应都没什么问题时，用甲醇或是乙腈沉淀较好，操作方便还能除去蛋白。不行的话在考虑提取，提取麻烦点。在不行的话用固相萃取或是液液萃取。胆汁，尿和粪最好过柱，能除去很多杂质~
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