记得在给色谱初学者讲解色谱的分离原理时很多教材和老师都会提到开山鼻祖茨维特那个古老的植物色素分离实验,这个经典的实验可以让初学者更加直观地了解分离过程。近日笔者有幸“重复”了这一实验,希望所提供的材料对各位老师在今后的相关培训过程中有所帮助。下面将整个实验过程介绍一下:
实验的最初目的是用GPC CleanUp(凝胶渗透色谱净化)方法来弃除茶叶样品中的大分子物质从而分析农残,在GPC净化过程中发生了非常有意思的事情。我们知道茶叶萃取液(当时使用乙腈提取)中组成非常复杂,如儿茶素,咖啡因,维生素及各种色素等,由于所使用的色谱柱是玻璃材质,在上样后非常巧合地观察到了颜色展开和分离的过程:
大家注意色谱柱的流向是从下向上。
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stage 1:上样后样品流到色谱柱中端,颜色初步展开,有初步的色环形成;
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stage 2: 颜色进一步展开;
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stage 3: 开始溜出色谱柱;
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stage 4: 溜出色谱柱,大家注意柱出口管线已经被“染色”;
采集到的色谱图:
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收集到的馏分: