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主题：【讨论】HILIC色谱柱的方法开发及经验交流（附HILIC使用方法）

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frappuccino
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发表于：2010/09/19 01:33:28 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
亲们：
现在越来越多的实验要求使用HILIC色谱柱进行LC-MS（MS/MS）实验了。

讨论1. 亲们使用HILIC的频率怎样呢？
A）每天都用。
B）每周一次。
C）每月一次。
D）半年一次。
E）一年一次。
F）曾经用过。
G）不好意思，没用过。

讨论2.  大家觉得C18柱常用， 还是HILIC常用呢？

讨论3.  大家使用HILIC色谱柱的小经验有那些啊？。。。。。

HILIC色谱柱简介：

引用于：Pandan1219 的【第二届原创大赛参赛作品】浅谈亲水作用色谱（HILIC）及其与质谱联用技术]

“1. HILIC的概念
亲水色谱（HILIC）是一种用来改善在反相色谱中保留较差的强极性物质保留行为的色谱技术。它通过采用强极性固定性，并且结合高比例有机相/低比例水相组成的流动相来实现这一目的。而这样的流动相组成尤其有利于提高电喷雾离子化质谱（ESI-MS）的灵敏度。
2. HILIC的分离机制
HILIC的分离机理在目前还存在着争议，主要包括以下三个方面：（1）分配机理（2）离子交换（3）偶极-偶极相互作用。更多的试验现象则表明HILIC的保留机理包含氢键作用、偶极作用和静电作用等多种次级效应，很难将其区分开来。。。。。”

HILIC方法开发经验大披露：
1. HILIC色谱柱的种类
              以waters 公司的HILIC色谱柱为例，分为HPLC和UPLC两种类型， 又分为Atlantis， Xbridge， Acquity三个品牌。 填料类型分为BEH，无封尾和Amide填料三种。
2. HILIC色谱柱的应用范围
              普通反向色谱难以保留的物质。
3.HILIC的对化合物的保留原理：
              亲水性吸附，离子交换和氢键作用。

未完待续。。

应用小TIPS：
1.HILIC柱如何平衡？
              HILIC柱使用70%的乙腈水溶液平衡。
2.HILIC柱如何保存？
            HILIC柱使用 90%的乙腈水溶液保存。
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2010/9/19 1:42:03 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
抛砖引玉

前言：
平日我常常都要使用HILIC色谱柱与其他色谱柱进行分离性能的对比。
久而久之，突然发觉现在使用HILIC柱的方法真是越来越多啊！
暮然回首，我的色谱柱的柜子里已经堆满了HILIC，而C18 只是被挤在了小角落里。
难道现在全球的研究方向已经突然转向了。。。。

赶紧连夜发帖与亲爱的液质版网友讨论。看看大家意见怎样？
顺便把自己使用HILIC的新的献上，起到抛砖引玉的作用。

1.  一直使用Waters 的HILIC较多，感觉质量还行，但是要小心waters 的HILIC是分两种类型的填料的 BEH HILIC和 HILIC。
很多waters 的销售都不清楚之一点。但是大家一定要注意，这两款的区别是很大的，保留的效果是不同的。

2. 费罗门公司的HILIC柱，感觉是小家碧玉型的，保留能力不是太强，但是清秀文雅， 峰型很好看。

3. HILIC的 流动相推荐使用乙腈。以后给大家细说。

4. 推荐使用乙酸铵， 这也以后再说。

5.不能使用100% 的乙腈，推荐使用到95%就行了。
  不能使用60%一下的乙腈。
  所以梯度范围小。但是足够用了。
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2010/9/19 10:24:36 Last edit by frappuccino
zhc609
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2010/9/19 9:15:32 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我们基本上两三天就用一次，做三聚氰胺和三聚氰酸，偶尔做一下链霉素。百草枯等。型号是waters的。感觉很稳定的。每次用完都用50%的乙腈水清洗一下，最后换成90%的乙腈水保存。
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weiweizhu009
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2010/9/19 9:37:53 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 zhc609(zhc609) 发表:
我们基本上两三天就用一次，做三聚氰胺和三聚氰酸，偶尔做一下链霉素。百草枯等。型号是waters的。感觉很稳定的。每次用完都用50%的乙腈水清洗一下，最后换成90%的乙腈水保存。[/quote
你用它来做百草枯，是否可以告诉一下流动相的比例，母离子，子离子，谢谢啦！
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frappuccino
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2010/9/19 10:20:15 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
提供MRM条件

举例：
Parathion  CAS 56-38-2 C10H14NO5PS  母离子 291.033 
ESI+     
母离子          子离子      CV        CE
291.9            236          30        14
291.9              110          30        33

UPLC条件
0min  2%甲醇+0.1%FA      ————10min  100%甲醇

色谱柱 ：waters UPLC BEH C18 （2.1*100mm，1.7um）  流速0.45ml/min
柱温 40度 

出峰时间  6.44min 
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2010/10/7 18:04:27 Last edit by frappuccino
work037
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2010/9/19 12:08:47 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
为什么不能用甲醇呢？为什么不能用100%乙腈呢？
希望得到解答。谢谢
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frappuccino
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2010/9/19 13:13:38 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
因为100%的乙腈可能对HILIC的中亲水的部分不利于键合相的伸展开。
使得保留性能下降。其中的解释也是经验，研究论文解释的也让人不太信服。所以大家可以一起讨论一下这点。

使用甲醇的问题也是这样的。在甲醇分子附近，HILIC的保留能力下降了，色谱峰型较差。
这也是经验结果。

现在这个领域的研究还是很热的。
比如使用电镜技术观察，HILIC填料在不同溶剂中的结构形态。
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otto-anna
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2010/9/19 22:11:26 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
弱弱的问一下：我只用HILIC柱子做过三聚氰胺，但是三聚氰胺好像是非极性的呀！这不是和你对HILIC下的定义不符合吗？
亲水色谱（HILIC）是一种用来改善在反相色谱中保留较差的强极性物质保留行为的色谱技术。它通过采用强极性固定性，并且结合高比例有机相/低比例水相组成的流动相来实现这一目的。
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2010/9/20 8:33:19 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
三聚氰胺性状为纯白色单斜棱晶体，不可燃，无味，低毒，密度1.573g/cm3 (16℃)。常压熔点354℃，急剧加热则分解；快速加热升华，升华温度300℃。在水中溶解度随温度升高而增大,在20℃时，约为3.3 g/L，即微溶于冷水，溶于热水，极微溶于热乙醇，不溶于醚、苯和四氯化碳，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等。
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肖筱
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2010/9/20 9:37:40 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可能是样品的原因，我们用HILIC比较少，主要是费罗门的，一般用在对于C18不容易保留的化合物上，流动相主要也是乙腈，在用的过程中发现的主要问题就是色谱柱很难平衡，通常用流动相平衡半小时还需要进空白样品才能完全平衡住，对流动相的要求貌似更苛刻。
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2010/9/20 12:01:41 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 肖筱(ya) 发表:
可能是样品的原因，我们用HILIC比较少，主要是费罗门的，一般用在对于C18不容易保留的化合物上，流动相主要也是乙腈，在用的过程中发现的主要问题就是色谱柱很难平衡，通常用流动相平衡半小时还需要进空白样品才能完全平衡住，对流动相的要求貌似更苛刻。


那你使用waters 的HILIC柱试试吧。还行的。菲罗门的柱子和waters的性质不一样。
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