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分子荧光光谱
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主题：【分享】【资料】分子荧光光谱法

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2010/9/28 11:13:59 22楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

（2）环境因素
①温度
      温度对荧光的影响很大。
      温度降低会减少碰撞和非辐射失活的概率，因此会增加荧光强度。例如：荧光素的乙醇溶液在0℃以下每降低10℃，荧光产率增加3%，当温度降低至-80 ℃时，荧光产率为100%。
     
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2010/9/28 11:16:58 23楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
②pH值 
含有酸性或碱性取代基的芳香化合物的荧光与pH有关。pH的变化影响了荧光基团的电荷状态，从而使其荧光发生变化。
③溶剂 
      溶剂极性增加，有时会使荧光强度增加，荧光波长红移。
      若溶剂和荧光物质形成氢键或使荧光物质电离状态改变，会使荧光强度、荧光波长改变。
      含重原子的溶剂（碘乙烷、四溴化碳）使荧光减弱，磷光增强。
④溶解氧
      往往使荧光强度降低。
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2010/9/28 11:18:44 24楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
测量荧光的仪器主要由四个部分组成：
  激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。

光源：
      最常用的是高压汞蒸气灯。发出的是较强的线状谱，其中365，398，436，546，579，690，734nm谱线较强。大多数荧光化合物都可以在一定波长范围内用不同波长的光诱发荧光，因此通常至少有一条汞线是适用的。
            高压氙灯发出的光线强度大，而且是连续光谱，克服了汞蒸气灯射线数目少、强度差别大的缺点。但氙弧灯热效应大，稳定性较差。
            高功率连续可调激光光源是一种新型荧光激发光源。激光的单色性好、强度大。激光光源近年来应用日益普遍。
            钨灯和氢灯发出的紫外光强度太小，在荧光中应用不多。
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2010/9/28 11:21:25 25楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
单色器：
第一单色器——选择激发光波长λ1 （＞250nm的紫外光），称为激发单色器。
第二单色器——选择(测量)发射光（荧光）波长λ2 ，与激发光入射方向垂直，称为荧光单色器。

样品池：
      采用低荧光材料，通常为石英池。

检测器：
      光电倍增管
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2010/9/28 11:22:34 26楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

荧光法的应用

荧光法灵敏度高、选择性好，可用于痕量分析，但是能产生荧光的物质较少，使其应用范围较小。


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2010/9/28 11:23:11 27楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1.荧光激发光谱和荧光发射光谱

      任何荧光化合物都具有两种特征光谱：
（1）荧光（发射）光谱：固定激发光的波长，测量不同荧光波长处荧光的强度，得到荧光光谱，即荧光强度—荧光波长图。
（2）荧光激发光谱（荧光物质的吸收光谱）：在荧光最强的波长处测量随激发光波长的改变而变化的荧光强度，得到荧光激发光谱。即荧光强度-激发光波长图。
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2010/9/28 11:24:49 28楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
2.激发光谱与发射光谱的关系


（1）镜像规则
    荧光光谱的形状与基态中振动能级的分布有关，而激发光谱的形状反映了第一激发态单重态中的振动能级的分布。一般情况下，基态和第一激发单重态中的振动能级分布是相似的，通常荧光光谱与激发光谱大致呈镜像对称。 

（2）Stokes位移
    Stokes位移是指激发光谱与荧光光谱之间的波长差值。
    荧光的波长总是大于激发光的波长。这是由于发射荧光之前的振动驰豫和内转换过程损失了一定的能量。
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2010/9/28 11:25:55 29楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
（3）荧光光谱的形状与激发光波长无关
      电子跃迁到不同激发态，吸收不同波长的能量，产生不同的吸收带，但荧光均是激发态电子回到第一激发单重态的最低振动能级再跃迁回到基态而产生的，这与荧光物质分子被激发至哪一能级无关。因此，荧光光谱的形状和激发光的波长λ1无关。


关于激发光的波长λ1：
①决定荧光物质是否能够产生吸收并发射出荧光；
②能够使荧光物质产生吸收并发射出荧光的激发光的波长并不具有唯一性；
③在保证激发的前提下，不同激发波长处的荧光发射光谱相同，但荧光强度不同。
④在进行荧光测定时，须选择激发光波长以保证荧光强度最大。
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2010/9/28 11:26:49 30楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
3.激发光波长λ1 和λ2的选择：

（1）首先，在紫外光区内，固定激发光波长（可以任意选择几个）对荧光物质进行荧光发射光谱的扫描，从而确定产生最大的荧光强度时的荧光波长λ2；

（2）固定荧光波长λ2，对荧光物质进行激发光谱的扫描，确定最佳的激发光波长λ1 。
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2010/9/28 11:27:39 31楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

4.定量方法

①标准曲线法：
    配制一系列标准浓度试样测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度，在标准曲线上求出浓度。
②比较法：
    在线性范围内，测定标样和试样的荧光强度，再进行比较。
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